在心血管研究中，人们常使用急性分离的心肌细胞做膜片钳或激光共聚焦实验，做上述实验时，需要细胞的数量不多，但要求细胞“耐钙”（不跳动）。如何在分离时每次都能得到“耐钙”的心肌细胞，已成为人们的关注热点。

 实际上，影响心肌细胞分离效果的因素很多，例如: (1)摘取心脏到主动脉插管迅速的时间，一般要求在2min 以内，时间过长可发生心肌缺血-再灌注损伤；（2）主动脉留存过短常导致插管穿过主动脉瓣而插入心室，过长会导致灌流液经主动脉分支流出，均可影响灌流效果；（3）Lang endo ff 装置事先要排尽气泡，否则气栓可导致心肌损伤；（4）注意调节灌流液的酸碱度，偏酸偏碱均可造成心肌损伤等。

 通常采用Langendorff 离体灌流装置分离心肌细胞。首先用正常含钙液预灌注10-20min（冲残血,还氧债）→无钙液灌注5min（解除心肌细胞间的桥粒和连接）→Ⅱ型或Ⅰ型胶原酶循环灌注（解离细胞间结缔组织）。由于称取酶量、生产公司和批号不同都会影响消化的时间和效果，所以各个研究小组报道胶原酶的消化时间也各不相同。一般当灌流液出现拉丝, 心脏膨大松软、颜色发白时停止胶原酶消化。

上述分离方法和注意事项可参见：

（1）张紫冠, 李卫华, 黄峥嵘等。SD 大鼠心肌细胞分离方法探索。心血管康复医学杂志 2010， 19（3）：274-278

（2）廖华，糜涛，涂志业等。成年大鼠心肌细胞分离方法的改良。中国组织工程研究与临床康复 第13 卷 第33 期 2009；13（33）：6536-6539    

（上述2篇论文可以从我的文献中“参考文献”类别中免费全文下载）

 

 传统的心肌细胞分离方法常采用固定的消化时间，结果常常是“有时欢乐有时愁”。香港大学的李贵荣教授提倡的“分段消化法”是分离心肌细胞“屡试不爽”的好方法。

 

 前几天，翻阅往日的照片时，无意中看见了我们和李贵荣教授的一些照片，它勾起了我们一段美好的回忆：

 1989-1990,我获得了世界卫生组织（WHO）的 奖学金，在全苏心脏病研究中心（莫斯科）学习膜片钳技术。杨宝峰院士相继在日本筑波Eisai研究所（1991-1992）和加拿大蒙特利尔心脏病研究所（1995-1996）读博士后。李玉荣教授也曾在全苏脑病研究所（1991-1992）做访问学者。为了在哈尔滨医科大学开展膜片钳研究，当时均为教研室副主任和副教授的我们三人，即杨宝峰（药理）、李玉荣（生理）徐长庆（病理生理），归国后自发组合成联合攻关小组。共同的理想，共同的信念，共同的战斗，使我们成为了休戚与共的好朋友，号称哈医大铁三角。

       联合攻关小组（杨宝峰，李玉荣，徐长庆）在研讨膜片钳实验

 

1997.6.20 – 23，为了推动膜片钳技术在全国的推广，哈医大举办了《膜片钳理论和实验学习班》。聘请当时加拿大蒙特利尔心脏研究所的李贵荣研究员为主讲人，杨宝峰教授、李玉荣教授和我作为副讲人，并向学员发放了由我们四人编写学习班讲义。

               

学习班全体合影

  会议结束时，我们还乘船游览了美丽的松花江，并在芦苇丛中合影留念。

 哈市江北合影（杨宝峰，李贵荣，李玉荣，徐长庆）

  在这次会议上，李贵荣教授向我们介绍了分离心肌细胞的“分段消化法”。

 所谓的“分段消化法”和传统的心肌细胞分离方法没有本质的不同，只是同一个心脏实施胶原酶的消化时间不同。首先以灌流液拉丝,、心脏松软、颜色发白确定一个平均消化时间（例如，30min）后，每次实施心肌细胞分离时，在这一时间点前后几个时间点（例如20、25、30、35、40等）分别剪去少许心肌（一般由心底逐渐移至心尖），放入KB液中吹打，镜下观察。在这些时间点中，总会有1个或多个时间点的消化时间合适，确保每次都能获得满意的分离效果，可谓“事半功倍”或“以一当十”。

从这次学术会议后，我们成为了好朋友，多次互相访问。

访问香港大学时合影

海峡两岸心血管研讨会合影（昆明）

“分段消化”分离心肌细胞的方法在本课题组的实践中每每奏效，因此，我愿意将它奉献给开展心肌细胞分离的朋友，希望也能助大家一臂之力。

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