MCE 国际站：GSK484 hydrochloride

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-100514

CAS：1652591-81-5

纯度：99.72%

存储条件：4°C，在氮气下储存，远离潮湿 *在溶剂中：-80°C，1 年；-20°C，6 个月（在氮气下储存，远离潮湿）

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：GSK484 hydrochloride 是一种有效且可逆的肽酰基精氨酸脱亚氨酶 4 (PAD4) 抑制剂。GSK484 hydrochloride 高亲和力与 PAD4 结合，在不存在钙的情况下 IC50 为 50 nM。在 2 mM 钙的存在下，IC50 为 250 nM。

生物活性：GSK484 hydrochloride 是一种选择性、可逆的肽基精氨酸脱亚氨酶 4 (PAD4) 抑制剂。在不存在钙的情况下，GSK484 hydrochloride 表现出与 PAD4 的高亲和力结合，IC₅₀ 为 50 nM。在 2 mM 钙的存在下，观察到显着较低的效力 (250 nM)。 IC50 和目标：IC50：50 nM（PAD4，没有钙），250 nM（PAD4，有 2 mM 钙）^[1] 体外： GSK484 表现出与 PAD4 的低钙形式的高亲和力结合，在没有钙 (0 mM) 和钙 ( 2毫米），分别。 GSK484 还以浓度依赖性方式抑制苯甲酰精氨酸乙酯 (BAEE) 底物的 PAD4 瓜氨酸化（在 0.2 mM 钙下），如使用 NH₃ 释放测定^{[1]< /sup>。 体内实验：为了确定 PAD4 抑制是否可以抑制癌症相关的肾损伤，每天用 4 mg/kg 的 PAD4 抑制剂 GSK484 治疗 MMTV-PyMT 小鼠，持续一周.该剂量抑制了癌症小鼠外周血中经历 NETosis 的中性粒细胞数量增加。同时，与未经治疗的荷瘤小鼠相比，MMTV-PyMT 小鼠尿液中的总蛋白水平显着降低，进一步支持了 GSK484 治疗后肾脏功能状态的改善。在一周内每天以 4 mg/kg 的剂量施用 GSK484 可使荷瘤小鼠的肾功能障碍迹象恢复到与 DNase I 治疗相同的程度，并且没有任何可检测到的毒性迹象[2] .}

体外：GSK484 hydrochloride 表现出与 PAD4 的低钙形式的高亲和力结合，在没有钙 (0 mM) 和钙 (2 mM) 的情况下，IC50 分别为 50 nM 和 250 nM。GSK484 hydrochloride 还以浓度依赖性方式抑制苯甲酰精氨酸乙酯 (BAEE) 底物的 PAD4 瓜氨酸化 (在 0.2 mM 钙下)，如使用 NH3 释放测定[1]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：为了解决 PAD4 抑制是否可以抑制癌症相关肾损伤，MMTV-PyMT 小鼠每天用 4 mg/kg 的 PAD4 抑制剂 GSK484 hydrochloride 处理一周。该剂量抑制了癌症小鼠外周血中经历 NETosis 的中性粒细胞数量增加。同时，与未经处理的荷瘤小鼠相比，MMTV-PyMT 小鼠尿液中的总蛋白水平显著降低，进一步支持了 GSK484 hydrochloride 处理后肾脏功能状态的改善。在一周内每天以 4 mg/kg 的剂量施用 GSK484 hydrochloride 可使荷瘤小鼠的肾功能障碍迹象恢复到与 DNase I 处理相同的程度，并且没有任何可检测到的毒性迹象[2]。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

动物实验：小鼠[2] 本研究包括两种转基因小鼠模型，乳腺癌的MMTV-PyMT小鼠模型（FVB/n背景）和胰腺神经内分泌癌的RIP1-Tag2小鼠模型（C57BL/6背景）。小鼠每天腹膜内注射PAD4抑制剂GSK484（4mg/kg）。GSK484以25mg/mL的浓度溶于99.9％乙醇中以产生原液，然后在注射200μL/只小鼠之前在0.9％NaCl中进一步以1:50稀释[2]。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：稳定表达 N 端 FLAG 标记的 PAD1、PAD2、PAD3 或 PAD4 的 HEK293 细胞通过逆转录病毒转导进行改造。细胞在直径为 15 cm 的培养皿中生长，在补充有 10% 胎牛血清的 DMEM 中达到亚融合，通过离心收获并在 PBS/2 mM EGTA 中清洗一次。细胞在 50 mM Tris-Cl、pH 7.4、1.5 mM MgCl2、5% 甘油、150 mM NaCl、25 mM NaF、1 mM Na3VO4、0.4% NP40、1 mM DTT 和蛋白酶抑制剂中裂解。将裂解物在 4°C 下与 DMSO（2%）、100 µM GSK199、GSK484、GSK106 或 200 µM Cl-amidine 预孵育 20 分钟。在 2 mM 钙存在下，在 37°C 下进行瓜氨酸化反应 30 分钟。将提取物加载到凝胶上，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质并转移到 PVDF 膜上。然后对瓜氨酸化蛋白质进行化学修饰，并使用抗修饰瓜氨酸抗体进行检测。使用抗 FLAG 抗体检测 FLAG-PAD 构建体[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：在含有 10 nM GSK215 的测定缓冲液（100 mM HEPES，pH 8，50 mM NaCl，5% 甘油，1 mM CHAPS，1 mM DTT）中，以不同浓度的钙（0、0.2、2 和 10 mM）对 PAD4 进行连续稀释。孵育 50 分钟后，使用单点饱和曲线确定每种钙浓度的表观 Kds。对于 IC50 测定，将测试化合物（例如 GSK484）在 DMSO（1% 最终测定浓度）中连续稀释，并在 PAD4（在每种钙条件下计算的 Kd）和 10 nM GSK215 存在下在相同范围的钙浓度下进行测试，使用相同的测定缓冲液和体积。反应孵育 50 分钟，然后使用四参数逻辑方程 [1] 计算 IC50 值。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

IC50 & Target：50 nM (PAD4, in the absence of Calcium), 250 nM (PAD4, in the presence of 2 mM Calcium)[1]

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参考文献：[1]. Lewis HD,  et al. Inhibition of PAD4 activity is sufficient to disrupt mouse and human NET formation. Nat Chem Biol. 2015 Mar;11(3):189-91.[2]. Cedervall J,  et al. Pharmacological targeting of peptidylarginine deiminase 4 prevents cancer-associated kidney injury in mice. Oncoimmunology. 2017 Apr 20;6(8):e1320009.

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