国际生物制品领域权威专业杂志《Biologicals》今年7月在线发表了“人用和兽用狂犬病疫苗替代检定方法国际研讨会报告：科学现状与未来规划”。

这次研讨会于2011年10月11-13日在美国爱荷华州Ames国家动物卫生中心举行。来自14个国家(包括美国、加拿大、欧盟、日本)的超过80位代表政府、制造商和学术界的科学家参加了研讨会。

目前大多数人用和兽用狂犬病疫苗的效力检定，需要在小鼠中用活狂犬病毒进行攻击实验。参会专家审查了目前在狂犬病疫苗的效力试验中可能减少、优化或取代动物使用的替代方法的应用和验证现状，对狂犬病疫苗效力检定方法未来的发展方向提出了系统的建议。

1.         鼓励疫苗生产企业进行研究和/或提供历史数据来支持取消目前要求的重复检定。如果以提交生产数据和检定的一致性为条件，监管部门依据单次检定就可发放许可，结果可将使用小鼠的数量减少50％。

制造商应考虑减少试验所用的稀释度的数目，只要这样做并不增加无效检定和进行复检的数量。在进行小鼠效力攻击实验时，最好同时测试多个批次的疫苗，还可同时进行样品稳定性试验。

2.         在近期可优先采用一种可替代小鼠攻击实验、同时已经验证可确定效力的实验，如：可采用小鼠血清中和抗体试验(SNT)。与攻击实验相比，SNT也有更好的时间效益比（3周对大于4周）。SNT已经完全标准化， 欧洲药典委员会已在2012年4月批准将SNT检测纳入修订的欧洲药典专论0451。

3.         在可行的情况下，特别是对于非佐剂疫苗，鼓励制造商考虑在批签发效力实验中直接改用抗原定量测试。

狂犬病毒G蛋白的天然折叠形式是与病毒颗粒相联的三聚体形式，具有高度的免疫原性。狂犬病疫苗的效力取决于此类构象完整的G蛋白。用能识别这样的G蛋白的单克隆抗体建立的ELISA方法是狂犬病疫苗效力最好的定量方法。如果可溶性G蛋白的存在会干扰免疫相关蛋白的检测，则应该先将其移除或封闭（或两者都包括）。

不鼓励进一步发展抗体结合试验（ABT）或单向辐射免疫扩散试验（SRID）检测作为效力实验的替代实验，因为它们与小鼠攻击试验的相关性较差，不能区分具有高免疫原性的与病毒颗粒相联的G蛋白与免疫原性较弱的单体G蛋白。 然而，SRID分析用于生产过程中检测G蛋白总量可能是有用的。

研讨会提出的建议将有望推动狂犬病疫苗效力试验的替代方法的实施，结果将既能确保人与动物疫苗的安全有效，又能通过优化和减少动物使用而有利于动物的福利。

[主要参考文献： Biologicals (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.biologicals.2012.07.005  

中国生物技术股份有限公司武汉公司狂犬病检测中心 严家新 研究员 供稿 ]

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