博文

狂犬病的实验室诊断(25)

已有 214 次阅读 2026-6-10 02:32 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病的实验室诊断(25)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章狂犬病的实验室诊断(25)

(Laboratory diagnosis of rabies)

5. 活病毒的检测(Detection of live virus)

通过将脑组织匀浆接种到幼龄小鼠的小鼠接种试验（mouse inoculation test, MIT），或活细胞培养物的狂犬病组织培养分离试验（Rabies Tissue Culture Isolation Test—RTCIT），可以检测活病毒的存在。MIT包括将来自可疑动物的脑组织匀浆通过脑内途径接种到乳鼠或幼鼠体内，然后进行一段时间的观察，并对任何死于该疾病的小鼠通过dFA进行确认性检测（Koprowski, 1966, 1973）。观察期通常为21天，临床症状通常在14天内出现，而对于用作阳性对照的小鼠适应实验室毒株，症状出现得更快。然而，根据病毒载量或涉及的狂犬病病毒物种/毒株的不同，临床症状可能在许多天/周后才会出现。因此，当怀疑潜伏期较长时（例如，临床样本中的非RABV狂犬病病毒），观察期可延长至28天或更长。因此，临床医生和兽医很少依赖此检测进行临床决策和病例管理。出于动物福利的考虑以及灵敏且特异的体外方法的建立，目前不推荐将MIT用于常规初级诊断。然而，当体外方法失败时，它仍然是分离或扩增病毒株、生成标准化对照材料以及用于研究目的的宝贵工具。

在诊断参考实验室中，涉及在哺乳动物细胞系（RTCIT）中体外分离狂犬病病毒和其他狂犬病病毒的技术已在很大程度上取代了MIT。将诊断材料接种到小鼠神经母细胞瘤细胞中（在8孔腔式载玻片或96孔微量滴定板中），然后孵育72小时。对于病毒载量低的材料，可能需要进行多次传代。因此，与MIT一样，从RTCIT获得结果的延迟使其无法用作主要诊断工具。此外，如果匀浆含有导致小鼠死亡或共感染细胞培养物的其他病原体，则需要采用其他方法来确认该病原体的性质。

6. 狂犬病的生前诊断（1）

(Antemortem diagnosis of rabies)

人类狂犬病的生前诊断在临床患病期间是可能的，主要限制因素是临床病程短暂以及病毒的间歇性排出。因此，快速准确的诊断对于患者管理和确定患者接触者是否需要暴露后预防都非常重要。通常，患者的神经功能状态每天都会显著下降，最终不可避免地导致死亡。

对于人类狂犬病的生前诊断，适合进行dFA检测的最佳样本是来自颈后部的皮肤活检材料，该材料应包含多个有神经分布的毛囊（Crepin et al., 1998）。初步评估包括对冷冻的皮肤活检样本进行冷冻切片、丙酮固定、用狂犬病病毒特异性荧光结合物染色，然后在荧光显微镜下检查。阳性观察结果通常出现在有神经分布的皮肤毛囊处。此评估在收到样本后几小时内即可完成，但取决于是否有冷冻切片机。这是一种高度特异的检测，但使用该方法对该样本得出的阴性结果不能绝对排除狂犬病；患者的后续样本最终可能呈阳性。

其他有用的样本是新鲜唾液、血清和脑脊液（CSF）。通过两种方法评估血清和脑脊液中的抗体。间接荧光抗体检测可以快速完成（即在几小时内），但它是一种结合试验，而不是抗体功能试验，并且可能产生假阳性结果，尤其是在因无关病因患有脑炎的患者中。快速荧光灶抑制试验（RFFIT）需要整整一天（20小时以上）才能完成，而荧光抗体病毒中和试验（FAVN）需要48小时，但它们是功能性检测，通过阻止狂犬病病毒感染细胞来评估狂犬病病毒中和抗体的反应性（见第13章）。

然而，在大多数患者中，抗体在临床病程晚期才产生，因此患者可能在大部分检查期间都保持血清阴性。病毒中和试验只有在提供未接种疫苗患者体内存在抗体的证据时才具有诊断价值。在大多数情况下，一旦首次怀疑狂犬病，通常会立即使用狂犬病免疫球蛋白和疫苗。

在进行这些检测的同时，来自皮肤活检组织的皮下组织和唾液通常也会进行RT-PCR检测。几项研究报告指出，将应用于皮肤活检组织的DFA试验与应用于唾液和皮肤活检组织的标准RT-PCR或hnRT-PCR相结合的检测组合，能够准确识别大多数人类病例（Brito et al., 2011; Crepin et al., 1998; Dacheux et al., 2008; Elmgren et al., 2002; Macedo et al., 2006; Smith et al., 2003）。一些探索仅使用唾液通过分子方法进行狂犬病生前检测的研究表明，尽管检出率可能相当高，但并未达到100%（Hemachudha & Wacharapluesadee, 2004; Nagaraj et al., 2006; Wacharapluesadee & Hemachudha, 2001），这是由于病毒间歇性地分泌到该体液中，和/或存在极低水平的病毒。对于确诊而言，对疑似患者进行连续采样是最佳选择，并且在仅使用此类样本做出阴性诊断之前必须考虑到这一点。Dacheux等人（2008）建议，如果对至少在三个不同天数采集的患者样本进行检测，可以达到100%的灵敏度。如果患者在患病2-3周后仍然存活或迅速康复，则鉴别诊断中包括狂犬病的可能性较小。