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狂犬病的实验室诊断(24)

已有 283 次阅读 2026-6-8 06:55 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病的实验室诊断(24)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章狂犬病的实验室诊断(24)

(Laboratory diagnosis of rabies)

4. 病毒RNA检测的分子生物学方法(续)

(Molecular methods of viral RNA detection)

4.7 其他用于狂犬病病毒检测的分子方法（2）

(Other molecular methods for rabies virus detection)

在菲律宾和巴西已经探索了使用RT-LAMP检测狂犬病病毒的方法（Boldbaatar et al., 2009），该方法能够区分吸血蝙蝠相关和犬相关的狂犬病病毒，但未能检测到某些其他野外分离株（Saitou et al., 2010）。也有研究报道了该技术成功应用于检测几种非洲狂犬病病毒（Hayman, Johnson, et al., 2011; Muleya et al., 2012）。前一项研究中的一些引物的生物素化版本也被整合到侧向层流装置中以促进产物检测（Hayman, Johnson, et al., 2011）。据报道，该RT-LAMP检测方法的灵敏度与RT-PCR相比非常有优势，而另一项将RT-LAMP检测方法与DFA试验和SYBR Green实时RT-PCR进行比较的研究表明，尽管该方法的灵敏度和特异性略低于PCR方法，但它仍有希望用于狂犬病病毒检测（Naji, Fadajan, Afshar, & Fazeli, 2020）。然而，必须牢记这些检测方法固有的一些挑战。考虑到需要在短片段靶序列内设计多个引物，特别是考虑到引物末端的单个错配可能严重干扰检测（Boldbaatar et al., 2009），设计能够检测广泛范围狂犬病病毒的广谱反应性RT-LAMP检测方法将非常具有挑战性。虽然这些替代性分子方法如果在区域流行的、遗传变异性有限的狂犬病病毒中得到验证，可能在局部层面具有现实可行性，但必须记住，在正在评估其中许多检测方法的非洲，许多狂犬病病毒变种以及其他狂犬病病毒物种广泛流行。迄今为止，这些检测方法均未经过大量病毒样本的验证，在它们被视为DFA试验或RT-PCR方法的合适替代方法之前，还需要大量的工作和改进。另一种显示出广泛前景的技术是基于重组酶聚合酶扩增（RPA），其中重组酶通过链置换过程促进引物与DNA靶标的等温结合，随后由DNA聚合酶进行链延伸。这一过程的多个循环导致双链DNA靶标的扩增，而包含逆转录步骤则允许检测RNA模板。与TaqMan RT-PCR类似，该检测方法使用正向和反向意义引物以及一种独特的DLP，通过增加的荧光进行产物检测。一项初步研究证明了RT-RPA用于狂犬病病毒检测的潜力（Coertse, Weyer, Nel, & Markotter, 2019; Schlottau, Freuling, Muller, Beer, & Hoffmann, 2017）。该方法还检测到了来自其他大陆的少量狂犬病病毒以及许多其他狂犬病病毒物种，未来可能会考虑采用这种技术开发泛狂犬病病毒检测方法的潜力。

另一种检测狂犬病病毒的实验性方法涉及使用微阵列技术，当与模板的非序列依赖性PCR扩增相结合时，该方法在检测和基因分型应用方面均显示出前景，并且可能成为鉴定新型狂犬病病毒的最有用工具（Gurrala et al., 2009）。然而，尽管这种方法可能是一种有用的研究工具，但在其被视为可行的诊断替代方法之前，还需要对该方法进行大量的改进。

（未完待续）

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