博文

狂犬病的实验室诊断(11)

已有 356 次阅读 2026-5-15 01:42 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病的实验室诊断(11)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章狂犬病的实验室诊断(11)

(Laboratory diagnosis of rabies)

3. 病毒抗原的检测（续）

(Detection of viral antigen)

3. 3 侧流层析试验

（Lateral flow assays）

最初，使用侧流层析试验（LFA）检测脑组织、唾液和细胞培养物中的狂犬病病毒获得了令人鼓舞的结果，与DFA试验相比，其敏感性为91.7%，特异性为100%（95.8% CI）（Kang等人，2007）。随后，又开发了多种LFA，并对六种市售LFA的分析敏感性和特异性进行了评估（Eggerbauer等人，2016）。使用现场样本时，敏感性从0%到100%不等，没有一种被研究的检测方法证明是令人满意的。在最近的一项实验室间试验中，评估了两种市售LFA，虽然对RABV毒株达到了100%的敏感性，但这些设备未能充分检测蝙蝠狂犬病病毒（Servat等人，2019）。因此，有必要使用本地流行病毒进行验证。这些检测方法尚未获得OIE批准，在用于狂犬病诊断时应谨慎使用。

目前，人们强烈希望能够在兽医诊所、人道协会、动物控制机构或野生动物机构，以及用于人类时，进行即时诊断（疾病检测）和血清学（疫苗反应验证）检测（Jayakumar & Padmanaban, 1994; Madhusudana, Paul, Abhilash, & Suja, 2004; Perrin, Gontier, Lecocq, & Bourhy, 1992; Vasanth, Madhusudana, Abhilash, Suga, & Muhamuda, 2004; Zanluca et al., 2011），并且已有为此目的而开发的原型检测方法（Kasempimolporn, Saengseesom, Huadsakul, Boonchang, & Sitprija, 2011; Servat et al., 2012）。最终的问题在于，狂犬病检测需要极高的敏感性，以免遗漏对人类或其家畜构成的公共卫生威胁。至少，这些类型的检测作为初步筛查工具是有用的。可以考虑几种策略。一种方法是尽可能使检测方法具有特异性，这意味着目标物会产生强阳性结果，无需进一步确认。所有其他结果则需要通过传统诊断方法进行确定性检测。另一种方法是尽可能以最高的敏感性进行筛查，即使知道一些真阴性样本可能会被判定为潜在阳性。筛查结果为阳性的样本可以作为推定阳性接受，或者送去进行确认性或确定性检测。这些检测的技术已经存在，但由于公共卫生影响以及狂犬病引发的许多人的情绪和担忧，其优化、监管批准以及最终用户接受的过程将比大多数动物疾病更为复杂。

3.4 福尔马林固定石蜡包埋组织的免疫组织化学

(Immunohistochemistry on formalin-fixed paraffin embedded tissues )

如果来自潜在患狂犬病动物的脑组织被固定在福尔马林中，将会出现显著的诊断延迟，因为组织需要时间完成化学固定。需要修剪组织样本并将其包埋在石蜡块中，以便用切片机切片并放置在显微镜载玻片上。然后，这些载玻片可以进行常规组织病理学染色，但需要特定的免疫组织化学程序来检测狂犬病病毒抗原。基于这种方法的研究技术需要大量的专业知识（Fekadu, Greer, Chandler, & Sanderlin, 1988; Hamir, Moser, Fu, Dietzschold, & Rupprecht, 1995），并且只能在少数有能力的实验室中进行。一种基于检测亲和素-生物素复合物（avidin biotin complex）的方法（Balachandran & Charlton, 1994）已被多次用于诊断提交至加拿大渥太华国家狂犬病参考实验室的动物样本。从提交福尔马林固定的组织开始，整个过程可能需要长达一周的时间。通常，需要使用这种诊断方法的情况很复杂，并且由于出具结果所需的时间，组织病理学检测通常更适用于研究或档案回顾性研究，而非常规诊断。

3.5 酶联免疫吸附试验

(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA )

基于单克隆抗体（MAb）的捕获酶联免疫吸附试验（ELISA）也可用于疑似样本中狂犬病的诊断（Xu等人，2007）。该ELISA（名为WELYSSA）使用四种针对狂犬病病毒核衣壳的小鼠单克隆抗体混合物，并使用代表狂犬病病毒属不同地理来源和系统发育谱系的毒株进行了验证。该检测方法已被证明具有高度的敏感性和特异性，可能对大规模的流行病学调查有用，但为确保最佳的敏感性和特异性，本地验证至关重要。该检测方法仅在有限情况下获得OIE批准。