导读：热图清晰展示差异代谢物在两组细胞中的表达模式，桑基图将代谢物关联至各自所属的代谢物类别。热图+桑基图组合图整体布局层次分明，便于快速识别受干扰的关键代谢物。 

《Science Advances》文章Crotonate suppresses breast cancer metastasis and promotes immunotherapy response by inducing ACSS2-mediated EZH2-K348 crotonylation. Fig 1A对MCF10A和MDA-MB-231细胞（n = 5）进行气相色谱-质谱分析。选取了前50个差异代谢物[P < 0.05，倍数变化（FC）> 2.0]进行层次聚类分析。图中左侧热图展示了50个差异代谢物的表达情况，右侧桑基图展示每个代谢物所属的类别。该图结构清晰、信息层次分明，既直观呈现了代谢物的表达差异，又便于快速识别受影响的代谢物（或者通路），为后续机制研究提供了明确的方向。

1，打开作图URL

https://www.bioinformatics.com.cn/plot_heatmap_plus_sankey_diagram_294

图2.绘图页面

2，示例数据

点击图片上方的示例数据，下载，并使用excel打开。

图3. 示例数据

示例数据包括1+1+N共三部分：

第1列：基因名，或者代谢物名等，表示热图的行

第2列：基因所属的通路名，表示桑基图右侧的分类

第3+列：基因在两组间的表达情况，其中第一行是分组信息，第二行是样品信息（不能有重复）。

注意：1）分组和样品信息不要包含特殊符号（包括：括号，空格，#，分号，中文，希腊字母等）或者以数字、点、下划线等开头（R不识别这种变量名）

2）该图不适合展示大量数据，建议不要超过100行

3，输入检查

示例数据：点击输入框下面的“示例”按钮，将载入示例数据。

真实数据：数据放在excel中，调整好后，Ctrl+A选中数据，Ctrl+C拷贝，Ctrl+V将数据粘贴到输入框中。

图4. 载入数据，输入检查

然后使用输入框下面的“输入检查”按钮先对输入数据进行检查。若检查不通过，请根据检查提示重复【修改-输入检查】步骤，直到检查通过（如下图所示），然后可以继续选择其他参数。

图5.输入检查结果

注：输入检查是新添加的功能，它会根据不同模块的输入要求，逐行逐列检查输入数据，并给出提示，以确保数据符合模块输入要求。建议每次提交前先进行输入检查。

4，选择参数

图6.绘图参数

图片大小：图片宽度，图片高度参数。画布的高度。

宽度和长度

热图宽度和热图高度：定义了热图自身的宽度和高度。图的高度。调整左侧热图所占宽度。

热图和桑基图间空白间距宽度：定义了左侧和右侧中间填写基因名的宽度，调整文字所占宽度。

桑基图的宽度：定义了右侧桑基图的宽度。调整桑基图所占宽度。

桑基图分组缩放：设置为1时，桑基图右侧分组与热图等高，设置为0.5时，桑基图右侧分组高度为热图的一半

注意：请联合上面几个参数设置最终图片的大小 

字体大小

图例标题字体大小：热图左侧的图例的标题文字（group和z-score）字体大小

图例刻度文字字体大小：热图左侧的图例垂直方向的字体大小（组名，zscore值）

行名字体大小：热图行名（中间的名字）的字体大小

列名字体大小：热图列名（热图下面）的样品名字体大小

行分组（桑基图右侧矩形）字体大小：桑基图右侧矩形分组文字字体大小 

热图颜色：热图渐变色的低、中、高颜色

列分组注释颜色：热图列分组的矩形框的颜色，超过10种使用系统默认颜色

行分组颜色：桑基图右侧矩形的颜色，超过10种使用系统默认颜色

新加功能：解决配色难题

  颜色集：提供了7种常见期刊的颜色集，点击后，在该论文的颜色集中随机挑选

  随机颜色：点击“随机”按钮后，会随机推荐10种颜色，点击一次，随机一次

  自定义：可以粘贴空格分隔的16进制颜色编号，例如 #E64B35 #4DBBD5 #00A087 

z-score转换：是否对数据进行z-score转换。 z-score就是给数据“去量纲化”，让不同尺度的数据可以公平比较。如果是做聚类等分析，就做；如果只是看原始数值，就不用做。

行聚类：是否进行行聚类

列聚类：是否进行列聚类

是否显示行名：是否显示中间的基因名。基因名的颜色同桑基图右侧分组矩形的颜色

字体 

设置了期刊杂志中最常用的两种字体：Times New Roman和Arial。如需使用其他字体，可以下载pdf或者svg图片，然后使用acrobat illustrator或者inkscape进行编辑修改

5，提交出图

检查通过，并且参数选好后，点击“提交”按钮，约3s后，会在页面上显示热图+桑基图组合图。我们提供了pdf、svg两种矢量图，png、tiff两种标量图供大家下载使用。

注：组合时会有一定的精度差，但是不影响图片展示。

图7.预览图

请使用Acrobat Illustrator，inkscape等软件编辑矢量图（pdf或svg），进行组图，调整文字、图像元素位置，字体，添加说明等操作，以满足个性化需求。

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