博文

狂犬病免疫力检测(11)

已有 277 次阅读 2026-7-11 13:56 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病免疫力检测(11)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第4版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第13章是《Measures of rabies immunity(狂犬病免疫力检测）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第13章狂犬病免疫力检测(11)

（Measures of rabies immunity）

2 狂犬病血清学方法(8)

(Rabies serology methods)

2.2 ELISA、IFA 和免疫层析检测 (4)

（ELISA, IFA, and immunochromatographic assays）

ELISA及其他结合试验具有多项优势，包括速度快、所需专业技能少、无需高级别生物危害设施即可进行操作，且操作的多个步骤可实现自动化（即血清的连续稀释、试剂添加及光密度读数）。此外，现有软件包可用于计算抗体浓度，从而实现客观读数与判读。ELISA方法的缺点包括偶联抗体或蛋白A/G的限制性，这限制了所检测免疫球蛋白的同种型。使用物种特异性anti-IgG（或IgM）将该检测的用途局限于特定物种。另外，尽管蛋白A的使用增加了检测对多种物种的适用性，但它不与所有形式的IgG3发生反应，因此会导致对含有较高比例IgG3抗体的血清中RABV特异性抗体水平的低估 (Carpenter, 1997)。

ELISA检测到的非特异性结合程度取决于抗原制备的纯度及包被步骤的效率，因为免疫球蛋白会非特异性地粘附于玻璃、塑料、污染物（如支原体）或细胞培养成分。与 RABV 结合的 IgG 抗体定量并不能精确展示血清中存在的中和抗体保护水平。因此，应用 ELISA 尝试测量 RVNA 量时，需要使用一个截断值（cutoff value），以合理确保该值代表目标人群多样化体液免疫反应中与 RVNA 的相关性 (Moore, Pralle, Engelman, Hartschuh, & Smith, 2016)。使用 IU/mL 数值报告 ELISA 结果并不能反映 WHO 定义的该计量单位，即每毫克蛋白含有1个国际单位的中和活性。因此，使用 IU/mL 来描述 RABV 滴度的抗原结合试验结果具有误导性。由于并非所有结合抗体都能中和病毒（无论是 RABV 还是其他病原体），从抗原结合试验获得的滴度在生物学上并不等同于 RVNA 滴度；因此，评估检测结果时必须谨慎。

早期抗体反应主要由 IgM 组成。因此，使用 anti-IgG 作为检测（二抗）机制的间接 ELISA 方法无法测量早期的 IgM 反应（见表13.2）。在临床前研究中使用 ELISA 替代血清中和试验（传统用法）来评估效力时，若将第 7 天和第 14 天的结果与既往研究结果进行比较，可能会得出效力较低的假设 (Moore et al., 2016)。图13.3 展示了将此类 ELISA 结果与血清中和结果进行比较时所显现的抗体动力学差异。这组个体的平均结果显示了 IgM 和 IgG 对血清中和测量的相对贡献；这种关系在个体之间存在差异，同时也取决于每个个体产生高效中和抗体的能力。WHO 承认ELISA 在RFFIT 或 FAVN 检测不可行的情况下可用于抗体检测或测量 (World Health Organization, 2018)。OIE 也认可间接 ELISA 用于某些目的 (Fooks, 2018)；其他 ELISA方法虽非规定的狂犬病检测法，但在监测野生动物种群疫苗接种活动中可能有用。在此类情况下，ELISA 试剂盒应针对所研究物种的检测目的进行验证。无论是兽医还是人类健康领域的医护人员或研究人员，在解读结果时应考虑到固有的差异，以实现狂犬病的最佳预防。