甜菜碱含量检测试剂盒说明书

(货号：NM-W-0126  微量法100T/96S)

一、产品简介：

甜菜碱是一种广泛分布于动植物及微生物体内的季铵型水溶性生物碱，是生物体内胆碱的氧化产物，可以增强免疫力、降血脂、抗氧化、抗肿瘤，并可作为甲基供体，参与促进动物蛋白质和脂肪代谢、增进食欲、缓和应激、调节渗透压、稳定维生素等多种生物作用，在化工、医药、食品添加剂等领域有较广泛的应用。

甜菜碱在强酸条件下和雷氏盐发生反应产生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成红色溶液，在 525nm处有特征吸收峰，测定525nm处的吸光值，可计算得样品的甜菜碱含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、乙醚、盐酸、丙酮和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

取烘干后过30-50目筛的样品约0.02g，加0.8mL蒸馏水，于60℃提取30min，期间不断震荡。再加入0.2mL提取液和约3mg试剂四，充分震荡混匀后，12000rpm，25℃离心10min，取上清液待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：50~100的比例进行提取。

2、标准溶液的配制：把20mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成3、2、1、0.5、0.25、0.125mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、甜菜碱含量(mg/g 质量)=x×V÷W×D=x÷W×D

V：加入提取液总体积，1mL；         W：样品质量，g；              

D：稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

1、试剂一配制时pH严格控制为1，否则会导致反应不完全，配制后4℃只能稳定几个小时，配制后尽快使用；

2、试剂二与试剂三对呼吸道有一定的刺激，请做好防护工作。