一、产品简介：

蔗糖酶即蔗糖转化酶（Invertase，E.C.3.2.1.26）在蔗糖代谢中催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适PH值，蔗糖转化酶分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型，许多报道均将中性转化酶同碱性转化酶看作一种转化酶。  AI的最适pH为3.0～5.0，AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI（B-AI）两种类型。前者分布在液泡中或细胞自由空间，后者存在于细胞间隙并结合在细胞壁上。

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，经光谱扫描在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成1.5、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按蛋白浓度计算：

单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位(U)。

S-AI活性(U/mg prot)=x×V1×10³÷(V1×Cpr)÷T=33.3×x÷Cpr

3、按样本质量计算：

单位定义：37℃每克组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位(U)。

S-AI活性(U/g 质量)=x×V1×10³÷(W×V1÷V)÷T=33.3×x÷W

V：加入提取液体积，1mL；        V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；

T：反应时间，30min；             W：样本质量，g；

Cp：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项：

1、如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；

2、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。