一、产品简介：

可溶性糖含量是果实品质的一项重要指标，果实成熟过程中可溶性糖含量增加。可溶性糖也是植物细胞渗透调节物质之一。测定可溶性糖含量可用于分析果实品质，了解植物的生理状况。  糖与浓硫酸可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛可再与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物。在一定范围内，生成物的颜色深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定

二、试剂盒组分与配制：

试剂名称规格保存要求备注试剂一粉剂×1瓶4℃避光保存试剂二液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解后，-20℃保存。（即10mg/mL标准品母液）工作液配制：在试剂一中加入 2.5 mL 试剂二，充分溶解后使用，如难溶解，可振荡溶解（用不完的试剂可 2-8℃保存一周）。

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、超声清洗仪、可调式移液器、浓硫酸、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取0.1g样本，加入 1mL 蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞至EP管中，加入1mL蒸馏水超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；沸水浴10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需8000g，25℃离心10min，取上清液待测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 mg/mL的标准溶液备用。

编号稀释前浓度（mg/mL）稀释液体积（μL）标准液体积（μL）稀释后浓度（mg/mL）Sx109001001S115005000.5S213002000.4S30.42002000.2S40.22002000.1S50.12002000.05S60.052002000.025

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm。

② 调节水浴锅至95-100℃，工作液用前需完全溶解。

③ 操作表：

试剂名称（µL）测定管标准管空白管样本40--标准溶液-40-蒸馏水404080工作液202020浓硫酸(缓慢加入)200200200充分混匀后，立即放入沸水浴中10min（封口膜缠紧，防止水分散失），冷却至室温后，取200μL反应液至96孔板中，于620nm处读取吸光值A，分别记为A测定、A标准、A空白。计算ΔA测定=A测定-A空白，∆A标准=A标准-A空白。（注：空白管只需测定1-2次）。

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按样本蛋白浓度计算：

可溶性糖（mg /mg prot）=x×V1÷(V1×Cpr)×D=x÷Cpr×D

3、按样本质量计算：

可溶性糖(mg /g质量)=x×V1÷(W×V1÷V) ×D=x÷W×D

4、按细菌/细胞数量计算：

可溶性糖(mg /10⁴ cell)=x×V1÷(N×V1÷V)×D=x÷N×D

5、按液体体积计算：

可溶性糖(mg/mL)=x×D

V：样品提取液总体积，1.0mL；           V1：加入样本体积，0.04mL；

W：样本质量，g；                       N：细胞数量，以万计；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；           D：自行稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。