一、产品简介：

多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物质之一。  利用水提醇沉法提取总多糖，苯酚-硫酸法测定总多糖含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、40目筛、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

组织样本：

①样本烘干研磨过 40 目筛，称取 5mg 样本，加入 1mL 蒸馏水，充分匀浆后于沸水浴中提取 2h（盖紧封口，以防止水分散失），冷却至室温，10000g，25℃离心 10min，取上清备用。

②取 0.2mL上步离心后的上清液至新 EP 管中，再加入 0.8mL 试剂二混匀，于 4℃静置过夜，取出后 10000g ，25℃离心 10min后弃上清，留沉淀（尽量保留沉淀）。

③向上步所得沉淀中加入1mL 蒸馏水，充分溶解沉淀后混匀待测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125 mg/ml的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至490nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按样本质量计算：

多糖(μg/g 干重)=x×V1÷V2×V3÷W×1000×D =5000×x÷W×D

V1：醇沉后重新溶解后的体积，1mL；              V2：进行醇沉的体积，0.2mL；

V3：提取时加入蒸馏水的体积，1mL；              W：样本质量，g；

1000：mg 到 μg 的换算系数。