如何快速而准确地鉴定蝙蝠中的狂犬病毒？(3)

前言：

目前中国的狂犬病监测主要是在家养动物（狗和猫）中进行，而对野生动物的狂犬病监测则还是一个薄弱环节，与美国和其他发达国家相比，每年检测的数量差距很大。绝大多数新型狂犬病毒都是在蝙蝠中发现的，其中可能有现有狂犬病疫苗预防效果很差甚至完全无效的新型狂犬病毒。因此让国内更多的狂犬病监测机构掌握在蝙蝠中快速而准确地鉴定狂犬病毒的方法很有必要。

以下介绍世界顶级狂犬病专家Charles E. Rupprecht博士主持撰写的一篇最新相关论文供参考。此论文去年发表在专业杂志《Zoonotic Disease (人兽共患病）》上，论文的题目是《Use of a Direct, Rapid Immunohistochemical Test for Diagnosis of Rabies Virus in Bats（用直接、快速免疫组织化学试验鉴定蝙蝠中的狂犬病毒）》（见参考文献）。

3.　结果　　

　从德克萨斯州获得9种蝙蝠的50只脑，其中患狂犬病蝙蝠20只，无狂犬病蝙蝠30只(表1)。样品依据系列列表解盲后，与DFAT相比，dRIT的敏感性(Se)为100% (0.832-1.0，95% CI)， 特异性(Sp)为96.7% (0.828-0.992，95% CI)。从黄昏蝠(N. humeralis)中得到一个假阳性结果。在显微镜载玻片上使用稍薄的脑印迹（brain impression）对该样品进行重新测试后，使用dRIT未检测到RABV抗原（排除了这个假阳性）。

表1.　直接荧光抗体试验(DFAT)和直接免疫组织化学试验(dRIT)对德克萨斯州疑似狂犬病蝙蝠脑样品检测结果的比较。

表１的英文原文：

Table 1. Comparison of Results Obtained upon Suspect Rabid Bat Brain Samples from Texas by the Direct Fluorescent Antibody Test (DFAT) and the Direct Immunohistochemical Test (dRIT).

　对亚利桑那州来自214个蝙蝠的大脑样本进行了dRIT测试,这些蝙蝠由15个物种组成，另外还有5个来自未识别物种的样本(表2)。一个样本来自墨西哥无尾蝠（Tadarida brasiliensis）,不适合进行dRIT和DFAT测试,因此不包括在这些总计中。与DFAT检测的97个阳性和117个阴性样本的结果相比，dRIT的敏感性(Se)为100%(0.963-1.0，95% CI),特异性(Sp)为94%(0.88 - 0.976，95% CI)。有7个假阳性结果：墨西哥无尾蝠2个;大棕蝠1个;峡谷蝠1个；洞穴鼠耳蝠1个；次长鼻蝠1个(图1)。

　阴性、非特异性染色表现为脑组织罕见的暗淡、粉红色或红色背景染色，未能见到不同大小和形状的清晰的洋红色包涵体，如同在本dRIT应用中采用的方案在狂犬病动物中检测到的(即与DFAT中荧光显微镜观察到的“苹果绿色”包涵体明显不同)。

　结合来自亚利桑那州和德克萨斯州的21个物种264份蝙蝠脑样本的检测结果，得出敏感性(Se)为100% (0.969 ~ 1.0，95% CI)，特异性(Sp)为94.6% (0.896 ~ 0.976，95% CI)， 阳性预测值(PPV)为93.6% (0.878 ~ 0.972，95% CI)，阴性预测值(NPV)为100% (0.974 ~ 1.0，95% CI)。

图1.　对疑似狂犬病毒感染的蝙蝠脑采用直接快速免疫组化法(dRIT)进行检测得到的具有代表性的显微镜观察结果。

(a)　经金标准直接荧光抗体试验(DFAT)证实，采用dRIT (400x)在患狂犬病的加州鼠耳蝠（Myotis californicus）的大脑中具有特异性染色(即检测到频繁的洋红色包含体)的阳性测试样本示例。

(b)　采用dRIT (400x)检测无狂犬病的次长鼻蝠（Leptonycteris yerbabuenas)脑内罕见非特异性染色的阴性检测样本示例，与DFAT的结果一致。

表2.　直接荧光抗体试验(DFAT)和直接快速免疫组化试验(dRIT)对亚利桑那州疑似狂犬病蝙蝠脑样品检测结果的比较。

表２的英文原文：

Table 2. Comparison of Results Obtained upon Suspect Rabid Bat Brain Samples from Arizona by the Direct Fluorescent Antibody Test (DFAT) and the Direct Rapid Immunohistochemical Test (dRIT).

（未完待续）　　

参考文献：

Charles E. Rupprecht，et al., Use of a Direct, Rapid Immunohistochemical Test for Diagnosis of Rabies Virus in Bats，Zoonotic Dis. 2022, 2(1), 1-8;　https://doi.org/10.3390/zoonoticdis2010001.

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