一、产品简介：

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。

根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液，75℃震荡提取25min，若提取过程中提取液有损失，最后可用提取液定容至1mL后，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。

【注】：a、若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取；b、若是固体干样本，先磨碎并过40目筛后，取0.02g的过筛后干样，加入1 mL提取液，其他步骤同上。最后离心得到的上清液待测。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm和700nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积200μL不变，如10μL上清液和190μL试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100μL上清液和100μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际加样体积代入计算公式中；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下:

1、按照样本质量计算：

总花色苷含量(μg/g)=(ΔA÷(ε×d)×V×Mr×10⁶)×D÷W=16.7×ΔA×D÷W  

2、按照样本蛋白浓度计算：

总花色苷含量(μg//mg prot)=(ΔA÷(ε×d)×V×Mr×10⁶)×D÷(Cpr×V)=16.7×ΔA×D÷Cpr  

ε：为矢车菊-3-葡萄糖苷消光系数，26900L/mol/cm；

Mr：为矢车菊素-3-葡萄糖苷分子量，449.2g/mol；

d：比色皿光径，1cm；                  D：稀释倍数，该反应体系下为10；

V：样本提取液，1mL=0.001L；          W：样本质量，g。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下:

1、按照样本质量计算：

总花色苷含量(μg/g)=(ΔA÷(ε×d)×V×Mr×10⁶)×D÷W=33.4×ΔA×D÷W  

2、按照样本蛋白浓度计算：

总花色苷含量(μg//mg prot)=(ΔA÷(ε×d)×V×Mr×10⁶)×D÷(Cpr×V)=33.4×ΔA×D÷Cpr  

ε：为矢车菊-3-葡萄糖苷消光系数，26900L/mol/cm；

Mr：为矢车菊素-3-葡萄糖苷分子量，449.2g/mol；

d：96孔板光径，0.5cm；                  D：稀释倍数，该反应体系下为10；

V：样本提取液，1mL=0.001L；            W：样本质量，g。

注意事项：

因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。