一、产品简介：

总黄酮，即黄酮类化合物；是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性和抗病虫害方面有重要作用。    在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、无水乙醇、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g新鲜样本；或者称取约0.02g烘干样本（将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的提取液（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用提取液稀释成1、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用提取液适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按样本质量计算：

总黄酮含量(mg/g 质量)=x×V÷W×D=1.5x÷W×D

V：加入提取液体积，1.5mL；             W：样品质量，g；

D：稀释倍数，未稀释即为1。