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狂犬病免疫力检测(8)

已有 383 次阅读 2026-7-6 10:33 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病免疫力检测(8)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第4版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第13章是《Measures of rabies immunity(狂犬病免疫力检测）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第13章狂犬病免疫力检测(8)

（Measures of rabies immunity）

2 狂犬病血清学方法(5)

(Rabies serology methods)

2.2 ELISA、IFA 和免疫层析检测 (1)

（ELISA, IFA, and immunochromatographic assays）

结合检测法是通过免疫球蛋白分子与其靶抗原特异性结合的能力来检测或测量免疫球蛋白的方法。这种结合可以通过凝集、沉淀、使用通常与显色系统偶联的二次检测系统进行可视化、通过光密度 (OD) 定量或荧光测量来检测。

ELISA 检测是最常用的结合检测法。ELISA 检测可基于间接法、竞争法和阻断法。其他结合检测法包括免疫层析法（如侧向流动）和间接荧光抗体 (IFA) 法。Western 印迹用于鉴定抗体的精细特异性。

抗原结合检测法如 ELISA 和 IFA 具有快速、简单的特点，通常在检测过程中不需要操作感染性 RABV，尽管抗原制备可能涉及活病毒。这些检测法依赖于抗体与抗原的相互作用，而不考虑抗体中和 RABV 的能力，它们可用于检测 RABV 结合抗体。以全病毒作为靶抗原的检测法可能有助于识别针对 RABV 上不同抗原的特异性 RABV 抗体，例如检测通过暴露或疫苗接种产生的狂犬病暴露。相反，纯化的病毒蛋白可用于区分可能存在的抗体的具体组成。例如，使用纯化的 RABV 糖蛋白作为抗原的检测法比使用纯化磷蛋白的检测法能更好地估计中和抗体，因为中和抗体是针对糖蛋白表位的 (Grassi, Wandeler, & Peterhans, 1989)。

结合检测法能够通过使用偶联的抗亚类 Ig 抗体作为二抗来鉴定 RABV 抗体的亚类，例如 IgM 和IgG。这种类型的检测可提供有关免疫反应动力学的额外信息 (参见图13.3)。

图 13.3 10 名人类受试者在狂犬病暴露前疫苗接种系列启动后第 0、7、14、21、28 和 42 天，通过间接 ELISA 测定的平均 IgM 和 IgG 狂犬病抗体水平以及通过 RFFIT 测定的 RVNA，显示了随着体液免疫反应的发展，IgM 和 IgG 抗体类别对中和活性的相对贡献。

IFA 技术包括将待测血清添加到固定有 RABV 感染细胞的载玻片上。血清中的狂犬病病毒抗体与感染细胞中存在的 RABV 蛋白上的抗原结合，随后通过 FITC 标记的抗 IgG 或抗 IgM 进行检测。需要荧光显微镜来评估载玻片上是否存在标记抗体。抗体的定量可通过血清的连续稀释来完成，以确定抗体滴度。由于使用感染细胞作为 RABV 抗原的来源，因此有可能检测到针对 RABV 抗原和细胞抗原具有特异性的两种抗体。在评估结果时，重要的是要考虑检测到非特异性于 RABV 抗原的抗体结合的可能性（即自身抗体、针对细胞抗原的抗体等）。