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狂犬病的实验室诊断(20)

已有 204 次阅读 2026-5-29 00:16 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病的实验室诊断(20)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章狂犬病的实验室诊断(20)

(Laboratory diagnosis of rabies)

4. 病毒RNA检测的分子生物学方法(续)

(Molecular methods of viral RNA detection)

4.4 检测丽沙病毒属病毒的实时RT-PCR方法(续)

（Real-time RT-PCRs for lyssavirus detection）

4.4.3 检测方法的选择（Choice of assay）

显然，已经报道了许多用于丽沙病毒检测的实时 RT-PCR 检测方法，其中一些是专门针对单个病毒株或某些病毒谱系开发的，而另一些则是为了检测更广泛的狂犬病毒株和/或丽沙病毒物种而开发的（表12.3）。为这两种不同类型的检测方法专门配制的试剂在相关出版物中有详细说明，当按照其规格使用时，无论采用何种仪器或预混液，都能产生等效的结果(Picard-Meyer et al., 2015; Picard-Meyer, Peytavin de Garam, Schereffer, Robardet, & Cliquet, 2019)。除了提供 RT-PCR 所需的底物和酶之外，许多方法还包含附加功能，例如包含孔间标准化染料（如 ROX）以及消除反应中污染性扩增子的策略（如UNG糖基化酶）。目前大多数方案采用一管式试剂盒，与两步法相比，这减少了污染的机会，使系统成为“闭管”系统，并提高了灵敏度。

尽管实时PCR作为诊断工具具有许多优点，但在应用该技术时，其某些技术方面的考量仍然很重要。鉴于TaqMan探针在循环后期可能发生非特异性降解，以及难以将结果与其他金标准测试（可能不如实时PCR方法灵敏）相关联，因此可能很难定义检测的适当终点（即，超过该循环数，样本不能被视为阳性或必须被视为可疑的循环数）。为了尽量减少与这些问题及其他问题相关的麻烦，鼓励严格遵守用于实时PCR检测开发和报告的“发表定量实时PCR实验所需最低限度信息”（MIQE）指南 (Bustin et al., 2009)。在某些情况下，可能需要使用新鲜样本进行重复检测才能得出确切的结论。

所有已发表的检测方法在其诊断范围方面都存在局限性，因为微小的毒株变异或新型丽沙病毒并未构成引物/探针设计的一部分。因此，在选择和建立用于常规诊断的这种方法时，必须考虑每个地区的丽沙病毒谱系和毒株。对于对脑组织进行监测并预期有大量阴性样本的实验室，建议使用较便宜的SYBR Green实时PCR。在进行可能存在新型或异型（divergent）丽沙病毒的扫描监测时，SYBR Green方法也是最理想的。事实上，新出现的或新型的病毒株可能会使高度特异性的基于探针的检测方法失效 (Fooks et al., 2009)。对于对疑似样本进行丽沙病毒诊断的实验室，如果预期其丽沙病毒物种范围有限、病毒载量低和/或需要快速分型，则特异性更高的基于探针的检测方法可能更受青睐。