一、产品简介：

β-半乳糖苷酶（Solid-β-Galactosidase, S-β-GAL)又称β-D-半乳糖苷半乳糖基转移酶，专一性作用于β-D-半乳糖苷类化合物的酶，参与土壤中碳水化合物的水解。

β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成邻-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30~50目筛、甲苯、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻。

2、标准溶液的配制：把20µmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（µmol/mL）。

2、按样本质量计算：

单位定义：每g土壤每小时产生1μmol对-硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活单位(U)。

S-β-GAL活性(U/g土样)=x×V÷W÷T×D=0.125×x÷W×D

V：反应体系总体积，0.25mL；                  T：反应时间，2h；      

W：样本质量，g；                             D：稀释倍数，未稀释即为1。