一、产品简介：

谷草转氨酶又叫天门冬氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.1），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT在心肌细胞中含量最高，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm吸光度的变化，即可计算GOT酶活力，计算酶活力。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、超声细胞破碎仪、天平、可调式移液器、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细胞或细菌的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 血清（浆）样本：直接检测。

2、标准溶液的配制：把2μmol/mL标准品母液用稀释液稀释成1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用稀释液适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本后再进行测定，则调整后的D和W须代入公式重新计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、GOT/AST活性计算：

（1）按样本质量计算：

单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位（U）。

GOT活性（U/g 质量）=x×V2÷（W×V1÷V）÷T=12x÷W

（2）按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位（U）。

GOT活性（U/mg prot）=x×V2÷（Cpr×V1）÷T=12x÷Cpr

（3）按血清（浆）体积计算：

单位定义：每小时每mL血清(浆)样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位（U）。

GPT活性（U/mL）=x×V2÷V1÷T=12x

（4）按细胞或细菌数量计算：

单位定义：每小时每10⁴个细胞或细菌催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位（U）。

GOT活性（U/10⁴ cell）=x×V2÷（细胞数量×V1÷V）÷T=12x÷细胞数量

V1：样本体积，0.005mL；           V2：标准溶液体积，0.03mL；

V：提取液体积，1mL；              W：样本质量，g；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；      T：反应时间，0.5h；     

细胞数量：以万计。