一、产品简介：

苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板（UV板）、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm。

② 操作表：

3、正式实验：

① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、按组织蛋白浓度计算：

活性单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活单位(U)。

PAL活性(U/mg prot)=ΔA×V2÷(V1×Cpr)÷0.1÷T=13.33×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算：

活性单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活单位(U)。

PAL活性(U/g质量) =ΔA×V2÷(V1÷V×W)÷0.1÷T=13.33×ΔA÷W

V：加入提取液体积，1mL；               V1：反应中样本体积，0.005mL；

V2：反应体系总体积，0.2mL；             T：反应时间，30min；

W：样品质量，g；                       Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下:

1、按组织蛋白浓度计算：

活性单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.05定义为一个酶活单位(U)。

PAL活性(U/mg prot)=ΔA×V2÷(V1×Cpr)÷0.05÷T=26.67×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算：

活性单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.05定义为一个酶活单位(U)。

PAL活性(U/g质量) =ΔA×V2÷(V1÷V×W)÷0.05÷T=26.67×ΔA÷W

V：加入提取液体积，1mL；               V1：反应中样本体积，0.005mL；

V2：反应体系总体积，0.2mL；             T：反应时间，30min；

W：样品质量，g；                       Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。