数年前，有研究者发现硫普罗宁（tiopronin）可选择性杀伤多重耐药（MDR）癌细胞，这一发现契合临床需求，相关论文顺利发表。但后续其他实验室均无法重复该实验结果。经全面排查确认：受试的耐药癌细胞已被支原体污染，支原体改变了细胞药物敏感性，造成实验假象。使用 Plasmocin 清除支原体后，硫普罗宁不再具备抗癌作用，这篇论文也因此撤稿。

这并非孤例。美国国立卫生研究院国家转化科学促进中心（NIH/NCATS）在2015年至2019年间对2028份细胞样本进行了系统检测，并将结果发表于SLAS Discovery期刊。该研究发现：

第一，初始检测的污染率超过10%。第二，来自外部实验室的合作样本污染率高达13%。第三，即使NCATS内部的样本，污染率也达到了5%。

基于上述问题，NCATS 建立了标准化质控体系：所有细胞系入库、复苏后均需检测；常规培养细胞每月至少检测一次；开展大规模筛选前必须复检；一旦检出污染，立即销毁问题细胞。

支原体是目前已知最小的自我复制型原核生物，直径仅为0.1至0.3微米，且缺乏细胞壁。这些特征带来三个关键问题：

其一，常规光学显微镜下完全无法观察到支原体，因为它们比大多数细菌小十倍以上。其二，支原体能够穿过常规的0.22微米除菌滤膜。其三，由于没有细胞壁，支原体对青霉素等作用于细胞壁的抗生素天然耐药。

更为关键的是，支原体污染不会引起培养基浑浊，也不会产生明显的pH变化。被污染的细胞在显微镜下可能看起来完全正常，但其基因表达谱、代谢状态、增殖速率和药物敏感性等均已发生显著改变。

根据美国菌种保藏中心（ATCC）的统计数据，连续细胞系的支原体污染率高达15%至35%。美国NIH的NCATS在2015年至2019年间对2028份细胞样本的系统检测也证实，初始检测的支原体污染率即超过10%。

这意味着，支原体污染并非小概率事件。

定期检测是防控支原体污染最可靠的手段。NCATS 推行常态化检测制度后，污染率逐年下降：从初期 10% 以上，到 2019 年降至 2.9%，整体实验质量大幅提升。

在当前主流的检测方法中，实时荧光定量PCR（qPCR）因其灵敏度高、检测速度快以及操作简便，已成为细胞培养支原体检测的优选方法。

上海翼和生物支原体qPCR检测试剂盒

检测范围覆盖120种支原体；灵敏度可达10 CFU/mL；操作便捷，数小时即可获得检测结果。

守护实验数据可靠性，从一次支原体检测开始。

参考文献：

[1] Roth JS, Lee TD, Cheff DM, Gosztyla ML, Asawa RR, Danchik C, Michael S, Simeonov A, Klumpp-Thomas C, Wilson KM, Hall MD. Keeping It Clean: The Cell Culture Quality Control Experience at the National Center for Advancing Translational Sciences. SLAS Discov. 2020 Jun;25(5):491-497. doi: 10.1177/2472555220911451. Epub 2020 Apr 1. PMID: 32233736; PMCID: PMC8506661.

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