支原体污染是细胞培养中最常见且棘手的问题之一，由于其隐蔽性强、影响广泛，对实验结果的可信度构成严重威胁。下表概述了支原体污染的主要危害：

面对支原体污染，预防、检测和处理三者缺一不可。

核心预防措施：最有效的方法是严格的无菌操作技术和良好的实验室管理。这包括工作环境的清洁、实验器材的无菌保障，以及避免操作人员带来的污染。对新引入的细胞系进行严格检测，并建立无污染的种子库也非常关键。

主要检测方法：由于支原体污染难以肉眼观察，定期检测至关重要。常用的方法包括：

培养法：“金标准”，但耗时长，可达数周。

指示细胞培养法（DNA染色法）：利用DNA荧光染料染色，在显微镜下观察细胞周围是否有荧光颗粒，通常需要几天时间。

化学发光法：通过检测在支原体和其柔膜细菌中存在的乙酸激酶和氨基甲酸激酶的活性，这两种酶在导致95%支原体污染的6个种属和大多数的柔膜细菌中均存在，操作简单时间短。但特异性较其他方法略差，且仍需培养一定时间确保检测效果。

PCR法（特别是qPCR法）：快速（几小时内完成）、灵敏度高，是目前常用的快速检测方法。如翼和生物的免抽提快检qPCR支原体检测试剂盒与高灵敏度支原体检测试剂盒灵敏度分别达100CFU/ml与10CFU/ml，可覆盖120种支原体。

污染后处理：一旦发现污染，最稳妥的办法是将污染的细胞高压灭菌后丢弃，以防扩散。若细胞极为珍贵必须挽救，可使用专门的支原体清除抗生素，但需注意其对细胞可能存在的潜在影响。