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大小鼠细菌真菌检测方法培养法和PCR方法比较

已有 110 次阅读 2025-12-19 16:18 |个人分类:大小鼠病原体检测|系统分类:科研笔记

实验动物的质量管理对实验动物生产、动物实验项目的顺利开展有着非常重要的意义,所以需要灵敏、快速、特异性高、性价比高的检测方案,来实现动物病原微生物的检测和筛查。2023年7月1日,新的国家标准GB 14922—2022 《实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测》正式实施,新国标对一些项目和内容进行了调整,增加了选取哨兵动物作为检测用动物。

 

大小鼠细菌真菌检测方法——培养法

对于检测方法新国标中指出:“按 GB/T 14926(所有部分)和 GB/T 18448(所有部分)的规定对第5章的所有指标要求逐项进行检测”。其中GB/T 14926是对病毒、病原菌检测方法的介绍,GB/T 18448是对寄生虫检测方法的介绍。病原菌检测则多采用菌落形态,菌体形态,生化反应,血液凝集反应等检测方法。GB/T 14926.1-2001 《实验动物 沙门菌检测方法》中描述了沙门菌的检测,检测原理是看菌落形态,菌体形态,生化反应,血液凝集反应等。沙门菌在培养基上有特定的生长、形态和生理生化特征;菌体抗原与相应抗体结合,产生凝集反应。GB/T 14926.17-2001《实验动物 绿脓杆菌检测方法》中描述了绿脓杆菌的检测方案,观察和测试菌落形态,菌体形态,氧化酶试验,生化试验。绿脓杆菌是革兰阴性杆菌,具有产生绿色色素和氧化酶等生化试验特征,可利用选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定,主要特点是绿色。

 

大小鼠细菌真菌检测方法——PCR法

培养法是传统的细菌真菌的检测方法,目前也有一些其他的病原体检测方法,如PCR检测法,也就是PCR检测结合电泳分析、荧光定量PCR检测等。近几年公布的一些地方标准和团体标准中就包含有核酸检测的方法。如2025年7月中国兽医协会CVMA 发布和实施了三项团体标准,其中一项是T/CVMA 274—2025 《实验动物 鼠棒状杆菌荧光PCR检测方法》,文件规定了实验动物鼠棒状杆菌的荧光PCR检测方法,适用于实验大鼠、小鼠的鼠棒状杆菌定性检测。T/CALAS 20-2017 《实验动物 牛棒状杆菌检测方法》,文件中牛棒状杆菌检测方法包括培养法和PCR法。

目前市面上提供的荧光定量PCR检测试剂盒包括单重检测和多重检测两种,相比较单重检测来说,多重荧光定量PCR检测方法的成本更低廉,更符合降本增效的原则。翼和生物采用多重荧光定量qPCR检测方案,开发了多款针对SPF大鼠小鼠的病毒和病原菌检测试剂盒,检测的病原项目符合国标GB14922—2022中的病毒和细菌、真菌的检测项目要求。翼和生物联检试剂盒中一个荧光通道可以同时检测2-3种病原菌,但是不进行具体病原菌的鉴定,也就是说一旦这个荧光通道有信号阳性,那么这2-3种病原菌都有可能是阳性。国标病原菌必检八项联检试剂盒、国标病原菌选检七项联检试剂盒。病原菌鉴定试剂盒中一个荧光通道只鉴定一种病原菌,所以可以通过荧光通道直接判断感染的具体病原菌。我们的鉴定试剂盒可以搭配联检试剂盒使用。我们还提供DNA/RNA核酸共提取试剂盒。实验流程方便快捷,总体实验过程大概4小时。

 

总之当前病原体的检测越来规范,对试剂盒检测效率、准确度和成本控制的要求越来越高。病原体有相当大的市场需求,伴随着这些市场需求,检测方法会越来越成熟,PCR的方法应用会越来越多。

 

 



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