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狂犬病免疫力检测(7)

已有 745 次阅读 2026-7-5 13:33 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病免疫力检测(7)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第4版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第13章是《Measures of rabies immunity(狂犬病免疫力检测）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第13章狂犬病免疫力检测(7)

（Measures of rabies immunity）

2 狂犬病血清学方法(4)

(Rabies serology methods)

2.1 血清中和试验(4)

(Serum neutralization assays)

RFFIT的其他改良还包括开发适用于特定国家或地区、并能保障持续供应的结合物。例如抗磷酸蛋白（P）-FITC 结合物的研制。由于在韩国无法获得已确立的抗 N 结合物，该研究团队通过研发并验证抗 P 结合物，制备出了可行的替代试剂(Um et al., 2017)。另一项改良则是利用已在其他检测中可用的试剂来进行 RFFIT，即免疫组织化学法(Madhusudana et al., 2014)。该检测旨在解决抗狂犬病荧光抗体结合物昂贵及需要使用荧光显微镜的问题，采用了与 DRIT 相同的生物素化抗 N 单克隆抗体(Lembo et al., 2006)。目前越来越需要能够确定多克隆和单克隆狂犬病抗体特异性的方法，这可以通过改良RFFIT来实现——例如使用不同的攻击病毒狂犬毒株、丽沙病毒（lyssaviruses）或逃逸突变株(Fallahi, Wandeler, & Nadin-Davis, 2016; Serra-Cobo et al., 2018)。Wright 等人(2008)开发的假型病毒法利用慢病毒载体表达 RABV 糖蛋白和报告基因（如 lacZ、GFP），可用于确定多克隆和单克隆狂犬病抗体的特异性(Wright et al., 2008)。通过表达来自不同 RABV 毒株的糖蛋白，可以建立一套假型病毒组合，用于跨物种比较研究。由于假病毒是无复制能力的颗粒，该方法适用于不具备高级别生物安全防护设施的地区。多项应用证明了该检测的可及性和适应性(Moeschler, Locher, Conzelmann, Kramer, & Zimmer, 2016; Nie et al., 2017)。随着单克隆狂犬病免疫球蛋白的应用与研发，确定产品中和能力的特异性变得十分重要。通过使用假型病毒作为攻击病毒来改良 SN 试验，比使用在细胞培养中难以生长的野毒株更容易，且具有更好的标准化潜力(Fallahi et al., 2016)。对于部分希望使用血清中和试验的用户而言，样本体积可能是一个挑战。为此目的对 RFFIT 或 FAVN 进行调整是可行的，但这会影响线性范围，因为微小体积在中和孵育期间更易受蒸发影响而导致浓度变化；不过，通过认真执行验证程序，仍可使其适用于该用途(Smith & Gilbert, 2017)。

近年来，人们一直在考虑用其他方法取代美国国立卫生研究院（National Institute of Health, NIH）疫苗效力试验——一种在小鼠体内进行的活毒攻击效力试验。原因包括该方法重复性差、精密度低，以及减少实验室检测中使用活体动物的倡议(Combes & Balls, 2014)。目前已提出了多种检测方法，其中最成功且最有前景的包括：

体外免疫原性试验，而非在小鼠中进行攻击试验：这是对 RFFIT/FAVN 的改良，参照《欧洲药典》中人狂犬病免疫球蛋白（RIG）效力的测定方法，以提高精密度(Kramer, Schildger, Behrensdorf-Nicol, Hanschmann, & Duchow, 2009)。

两种体外抗原捕获 ELISA 试验：

免疫捕获 ELISA，使用同一针对抗原位点 III 的单克隆抗体进行捕获和检测(Gibert et al., 2013)。

免疫捕获 ELISA，使用两种单克隆抗体，一种针对抗原位点 III 用于捕获，另一种针对抗原位点 II 用于检测(Chabaud-Riou et al., 2017; Morgeaux et al., 2017)。

上述拟议方法均表现出良好的精密度与重复性。关于使用体外血清学方法进行狂犬病疫苗效力检测的讨论与建议，在美国国家毒理学计划替代毒理学方法评价机构间中心（NICEATM）与国际生物制品标准化联盟（IABS）会议上得到了详细阐述(Poston et al., 2019)。会上报告称，基于 Chabaud-Riou 论文所述的免疫捕获法在与NIH方法的比较中表现更优，现正由欧洲药品质量管理局（EDQM）考虑采纳实施。会议总结指出，若无国际监管机构及生产企业在批准使用体外血清学方法方面的合作与承诺，全球范围内的推广至少可以说是困难的。