博文

狂犬病的实验室诊断(21)

已有 567 次阅读 2026-5-31 11:02 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病的实验室诊断(21)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章狂犬病的实验室诊断(21)

(Laboratory diagnosis of rabies)

4. 病毒RNA检测的分子生物学方法(续)

(Molecular methods of viral RNA detection)

4.4 检测丽莎病毒属病毒的实时RT-PCR方法(续)

（Real-time RT-PCRs for lyssavirus detection）

4.4.4 必需的对照

在任何诊断检测方法中，使用适当的对照对于正确解读结果至关重要。对于分子检测方法，强烈建议使用以下对照：

模拟提取对照

应使用已知狂犬病阴性的样本与待测样本并行进行RNA提取，以控制因气溶胶产生或试剂污染导致的任何意外污染。理想情况下，阴性样本应包含狂犬病阴性的脑组织，但如果不易获得此类组织，也可使用水样。

阳性和阴性PCR对照

在设置PCR时，每次检测运行应至少包含一个水样作为阴性对照，以及来自一个或多个狂犬病阳性样本的RNA作为阳性对照。任何阴性对照或阳性对照出现失败的检测运行都必须视为无效，并重复PCR。当检测大量样本时，建议使用多个阴性对照并与样本穿插放置。

模板完整性对照

如果样本完整性存在疑问，评估样本是否适合进行PCR检测可作为一种有用的对照。Smith, McElhinney, Heaton, Black, and Lowings (2000)描述了一种核糖体RNA（rRNA）内部对照，该对照适用于14种不同哺乳动物物种，并可以整合到狂犬病病毒RT-PCR中以评估模板质量。该方法稍作修改后，与狂犬病病毒RT-PCR分开进行，已被证明对于加拿大渥太华国家狂犬病参考中心处理的样本评估非常有用（Nadin-Davis et al., 2009, 2012）。任何未能扩增此类内部对照的样本均应被判定为不适合检测。此类对照对于应用研究也具有不可估量的价值；例如，用于探究RT-PCR在检测储存于50%甘油盐水中的脑组织中狂犬病RNA的实用性的研究中出现的矛盾结果（Biswal, Ratho, & Mishra, 2007; Muleya et al., 2012）。

使用对照是任何实时RT-PCR检测方法的重要方面，因为这些检测方法往往比标准RT-PCR更容易受到抑制因子的影响。检测宿主18S rRNA（Coertse et al., 2010）或β-肌动蛋白mRNA的检测方法最常作为内部对照，用于通过5’核酸酶检测方法（Hughes et al., 2004; Nadin-Davis et al., 2009; Wakeley et al., 2005）检测狂犬病病毒RNA。Hoffmann及其同事探索了使用其他几种对照来评估RNA提取和PCR抑制效应（Hoffmann, Depner, Schirrmeier, & Beer, 2006; Hoffmann et al., 2010）。