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狂犬病的实验室诊断(16)

已有 943 次阅读 2026-5-23 09:08 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病的实验室诊断(16)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章狂犬病的实验室诊断(16)

(Laboratory diagnosis of rabies)

4 病毒RNA检测的分子生物学方法(续)

(Molecular methods of viral RNA detection)

4.3 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法（续）

(Reverse transcription-polymerase chain reaction methods)

4.3.4 PCR产物检测

(PCR product detection)

传统上，PCR产物在琼脂糖凝胶电泳后通过溴化乙锭染色进行检测，溴化乙锭是一种嵌入DNA碱基之间的染料，在紫外光下易于观察。这样可以参照标准DNA标记物确定扩增子的大致大小。现在市面上有替代性的、毒性较低的染料可以取代溴化乙锭，并能产生相当的灵敏度。过去使用过的其他检测方法包括：在将扩增子从凝胶Southern转移至膜之后(Heaton et al., 1997; Heaton, McElhinney, & Lowings, 1999)，或通过基于ELISA的方法(AravindhBabu, Manoharan, & Ramadass, 2014; Black et al., 2000; Whitby, Heaton, Whitby, O’sullivan, & Johnstone, 1997)，将扩增子与狂犬病特异性寡核苷酸/DNA探针杂交。基于探针的方法可以确认扩增子的特异性(Heaton et al., 1999)，并且在极少数情况下，已识别出大小与预期产物相似的非特异性条带为假阳性(Trimarchi & Smith, 2002)。还有一种使用快速焦磷酸测序技术对泛丽沙病毒RT-PCR产生的扩增子进行检测和鉴定的方法也有描述(De Benedictis et al., 2011)。这些方法中的大多数现在已被实时RT-PCR技术所取代。

4.4 检测丽沙病毒属病毒的实时RT-PCR方法

(Real-time RT-PCRs for lyssavirus detection )

通过在封闭的管系统内结合核酸的扩增和检测，实时PCR平台相比传统的基于凝胶的RT-PCR，能更快速、更可靠地指示疑似样本中是否存在丽沙病毒RNA。虽然有描述两步法实时RT-PCR(Hayman, Banyard, et al., 2011)，但当前的趋势是采用封闭管策略，即整个RT-PCR作为一步反应进行；这既降低了导致假阳性结果的样本交叉污染风险，也缩短了检测周转时间(Marston et al., 2019; Wadhwa et al., 2017; Wakeley et al., 2005)。在这些需要专用热循环仪设备的系统中，扩增子的产生与反应中包含的荧光团荧光增强直接相关。

支持该技术发展的两种最流行的化学方法都已应用于丽沙病毒检测方法的开发，一些较常用的检测方法列于表12.3，并在以下章节中描述。

（未完待续）

狂犬病的实验室诊断(1) 2026-04-26

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狂犬病的实验室诊断(4) 2026-04-30

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