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STORM数据处理中漂移补偿

已有 4419 次阅读 2013-6-14 10:30 |个人分类:评论|系统分类:科研笔记| 数据处理中漂移补偿

实验中的漂移基本上无法避免的。事先预热仪器(特别是样品平台和压电平台),可以减少实验中的样品漂移。在(d)STORM实验中,如果使用非常高的激发光强,加快荧光分子进入稳暗态的速度,配以很高的采集速度(100Hz以上),可以将单张图片的采集时间压缩在数分钟之内,这样实验期间的漂移就减少到无需补偿的程度。莱卡公司的GSD系统使用特殊的样品平台,也可以极大的减少漂移。不过对于多数的试验,在后期数据处理中进行漂移补偿都是必不可少的。最普遍的方法,是在样品中加入能够持续发光的小颗粒(一般是100-200nm大的金颗粒)。这些颗粒在大多数时间内会发光,从而被定位,以它们为准标,可以看出样品的漂移轨迹,并且予以补偿。对于某些没有观察到这些准标的帧,一般用内插法估计它们的位置,同时样品的漂移轨迹,一般会予以一定的平滑化,以减少补偿算法对噪音、单次分子定位误差的敏感度。这种方法也可以推广到三维条件下。另一种方法是利用图像的自相关性。对于数万帧的实验数据,虽然任何两帧之间的图像差异很大,但如果将任意数百帧的叠加起来,不难发现它们都呈现同样的结构,既样品的宏观结构。所以,使用平移窗口的方式,以每一帧为中心,若干帧为窗口大小,累计这个窗口内所有的分子信息,可以获得一系列的叠加图,这些叠加图之间的自相关性,可以提供样品漂移的参数。




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