狂犬病的实验室诊断(5)

前记: 

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第12章是《Laboratory diagnosis of rabies(狂犬病的实验室诊断）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第12章 狂犬病的实验室诊断(5)

(Laboratory diagnosis of rabies)​

1. 基于实验室的狂犬病诊断检测（续）

(Laboratory-based rabies diagnostic testing )

1.4 狂犬病诊断的最优采样(Optimal sampling for rabies diagnosis )

对于所有狂犬病诊断方法而言，最优采样是成功检出病原体的关键。由于疾病期间病毒会在局部聚集，因此推荐采集脑干（例如延髓）和小脑。虽然在大多数国家，会将疑似动物的尸体（小型哺乳动物）或头部送交实验室进行诊断，但这并不总是可行的，例如对于大型物种、大量样本，或者冷链/资源有限的情况。在此类情况下，有时需要在现场取出脑组织（Jarvis, Brown, Appler, Fitzgerald, & Davis, 2019）。然而，在现场条件下安全、准确地取出大脑的特定区域往往具有挑战性。尽管在大多数患狂犬病动物的整个大脑中都能广泛检测到病毒抗原，但在某些样本中，其分布仅限于脑干区域（Bingham & van der Merwe, 2002）。基于这些观察结果，建议必须检查延髓、脑桥或中脑水平的脑干完整横截面，以进行确诊。 

表 12.1 腐烂尸体中狂犬病病毒、抗原和RNA的检测期限（McElhinney et al., 2014）。

 表 12.1 的英文原版：

理想情况下，应在动物死亡后24小时内提交尸体或脑组织，并在运输期间及检测前保持冷藏。然而，在一些国家，冷链运输或储存并不可靠或根本无法获得。动物尸体也可能在被发现时已处于不同程度的腐烂状态。虽然腐烂样本呈阳性结果可能是可靠的，但任何阴性结果都将无效，因为检测灵敏度可能会受到影响。一项研究利用感染的小鼠尸体在三种温度下放置不同时间，测定了狂犬病病毒、抗原和RNA的检测期限（McElhinney, Marston, Brookes, & Fooks, 2014）。在35°C下可检测到具有传染性的病毒长达3天，在低温下可长达18天。正如预期的那样，病毒抗原则比病毒更稳定，而即使在腐臭的样本中也能检测到病毒 RNA（表 12.1）。研究表明，与在检测前刚从腐烂尸体中取出脑组织相比，从尸体中取出并在次优条件下储存/运输的组织分解速度更快。因此，冷链运输和储存至关重要，对于腐烂样本所采用的检测方法的选择也同样重要。

在没有冷链的情况下，人们探索了其他保存诊断样本的方法。研究表明，滤纸上干燥的脑组织匀浆（Wacharapluesadee, Phumesin, Lumlertdaecha, & Hemachudha, 2003）或 Whatman Flinders Technology Associates (FTA) 卡（Nadin-Davis, Sheen, & Wandeler, 2012; Picard-Meyer, Barrat, & Cliquet, 2007）具有诊断价值，可用于狂犬病的分子筛查；甚至可以直接从 FTA 卡中恢复完整的狂犬病基因组序列数据，并用于流行病学研究（Goharriz et al., 2017）。至关重要的是，材料必须在 FTA 卡上完全干燥，且不能过载，以确保病毒完全灭活，并允许通过常规邮政服务在室温下安全运输。

研究人员尝试对狗的非神经样本（包括口腔拭子、触须和毛囊）进行狂犬病病毒 RNA 筛查，并取得了一定成功，这些样本比脑组织更不易腐烂（Wacharapluesadee et al., 2012）。活跃蝙蝠监测活动通常也包括通过病毒分离或分子检测来筛查口腔拭子（Schatz et al., 2013）。然而，此类样本类型的病毒排出是暂时性的，与脑组织相比，使用此类样本会降低检测灵敏度，因此目前似乎不建议用这些其他样本类型替代脑组织来提供准确诊断。

（未完待续）

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