一、产品简介：

植物吸收的磷主要是H2PO4-的形态，因此土壤中速效磷含量是评价土壤对作物磷供应能力的一种手段，对于施肥有着直接的指导意义。

用弱碱法提取碱溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成880nm有特征吸收峰的物质，通过测定880nm光吸收，即可计算磷含量。

二、试剂盒组分与配制：

【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，免磷污染。

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅、研钵、天平、可调式移液器、漩涡震荡仪、30-50目筛和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样风干，过30-50目筛，建议称取约0.1g土样，加入1mL提取液，振荡提取30min，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。【注】：称取按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：10的比例进行提取。

2、标准溶液的配制：把10μg/mL标准品母液用提取液稀释成10、8、6、4、2、1 μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至880nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将样本适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、按样本质量计算：

土壤速效磷含量(μg/g土样)=x×V1÷（W×V1÷V）×D=x÷W×D

V1：加入样本体积，0.04mL；           V：加入提取液体积，1mL；

W：样本质量，g；                     D：稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

1、工作液应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。

2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管或EP管等试验器材均要求严格无磷。

3、显色结束后应立即检测。

4、用96孔板检测时，注意板孔中的液体有无气泡，如有气泡应排除气泡后再测定OD值。