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一、产品简介:
速效钾是土壤中易被植物吸收利用的钾素,是表征土壤钾素供应状况的重要指标之一。及时测定和了解土壤速效钾的含量及其变化,对耕地地力评价及对指导钾肥的施用有着重要作用。
钾离子与四苯硼钠作用,形成不溶于水的白色四苯硼钾沉淀,产生的浊度在一定范围内与钾离子浓度成正比,通过检测其在 420nm 处的浊度来测定土壤速效钾的含量。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体70mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 | 自备 | 4℃保存 | 甲醛(市售浓度为37%) |
试剂二 | 液体6mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂三A | 粉剂×1瓶 | 4℃避光保存 | 临用前加入5mL试剂三B充分溶解备用。 |
试剂三B | 液体10mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 液体1mL×1支 | 4℃保存 | 20μmol/mL标准品母液。 |
三、需自备的仪器和用品:
酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、甲醛、蒸馏水。
四、操作步骤:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、预实验样本制备
称取0.2g风干土样,加入1mL提取液,振荡提取1h,10000rpm,25℃离心10min(若离心后上清中仍有杂质,建议将上清再次离心,至澄清),取上清液待测。【注】:按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例提取。
2、标准溶液的配制:把20μmol/mL标准品母液用提取液稀释成0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液备用。
编号 | 稀释前浓度(μmol/mL) | 稀释液体积(μL) | 标准液体积(μL) | 稀释后浓度 (μmol/mL) |
Sx | 20 | 180 | 20 | 2 |
S1 | 2 | 120 | 80 | 0.8 |
S2 | 0.8 | 100 | 100 | 0.4 |
S3 | 0.4 | 100 | 100 | 0.2 |
S4 | 0.2 | 100 | 100 | 0.1 |
S5 | 0.1 | 100 | 100 | 0.05 |
S6 | 0.05 | 100 | 100 | 0.025 |
3、预实验上机操作:
① 酶标仪预热30min以上,调节波长至420nm。
② 操作表:
试剂名称(µL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 50 | 50 | - | - |
标准溶液 | - | - | 50 | - |
提取液 | - | - | - | 50 |
试剂一 | 25 | 25 | 25 | 25 |
漩涡混匀,室温静置5min。 | ||||
试剂二 | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂三A | 75 | - | 75 | - |
试剂三B | - | 75 | - | 75 |
混匀后,室温,准确反应5min,于420nm处读取吸光值A,分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。ΔA测定=A测定-A对照,∆A标准=A标准-A空白。 (注:空白管只需测定1-2次) |
4、正式实验:
① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围:高于最高值建议将待测样本用提取液适当稀释后再进行测定,低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定,并将改变后的D和W代入公式计算;
② 确定好最适实验条件后,正式实验样本制备同预实验样本制备;
③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行(标准管和空白管预实验已做,正式实验可选做)。
五、结果计算:
1、以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。
2、速效钾含量(mg/kg)=x×10-3 ×V÷W×39=0.039×x÷W
10-3:单位换算系数,1μmol=10-3 mmol; V:加入提取液体积,1mL;
W:样本质量,kg; 39:钾离子的相对分子质量。。
注意事项:
1、 提取液刚从低温(4℃)条件取出若有晶体析出,震荡使其溶解即可。
2、 甲醛为有刺激性气味的有毒物质,建议本试验在通风橱中操作。
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GMT+8, 2024-11-29 13:44
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