人用及兽用狂犬病疫苗(9)

前记: 

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第14章是《Human and animal vaccines(人用及兽用疫苗）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第14章 人用及兽用疫苗(9)

Human and animal 的vaccines

14. 狂犬病病毒纯化（RABV purification）

蔗糖密度梯度超速离心（rate zonal ultracentrifugation）和柱色谱法（column chromatography ）适用于狂犬病病毒(RABV)的纯化。密度梯度超速离心是一种广为人知且成熟的经典纯化技术，通常用于纯化大批量病毒。简而言之，该方法的原理是根据颗粒密度的差异进行分离，因此，当应用于病毒时，可将病毒与更轻和更重的细胞材料分离开。该技术的主要优点是能够将浓缩和纯化步骤结合在一个单元操作中。同时，该技术能够很好地分离完整的病毒粒子与空衣壳，而这通过色谱法难以实现。尽管从理论上讲，通过大规模连续超速离心，有可能在一次操作中对 10^15 个病毒粒子进行区带分离，但该技术最终繁琐且放大成本高昂(Altaras et al., 2005)。尽管存在这些限制，一些制造商仍使用速率区带超速离心进行狂犬病病毒(RABV)纯化。

可放大的色谱分离技术被认为是大规模下游加工的潜在替代方案。色谱法已广泛用于病毒的捕获、浓缩和纯化，其使用了三种不同的固定相排列方式：填充床（ packed beds）、膜吸附器（membrane adsorbers）和整体柱（monoliths）。对于疫苗纯化，填充多孔床有两个主要缺点：由压降（pressure drop）和质量传递阻力（mass transfer resistances）之间的权衡所限制的流速，以及在大多数情况下，动态结合容量较低，因为在正常接触时间内可用于吸附的表面积仅限于吸附剂颗粒的外表面(Nestola et al., 2015)。事实上，将病毒颗粒吸附到固相上，是从细胞和培养基来源的杂质中分离和回收病毒的一种方便且实用的选择。色谱分离是由病毒与最接近的杂质及固相之间选择性的物理化学相互作用驱动的。吸附方法具有几个重要优点：可以使用高流速，从而限制处理时间，保护不稳定病毒的生物活性，并允许以相对较低的成本进行放大(Andreadis, Roth, Le Doux, Morgan, & Yarmush, 1999)。然而，重要的是要记住，设计适合病毒纯化的选择性色谱方案必须考虑病毒的结构、物理和化学表面性质(Braas, Searle, Slater, & Lyddiatt, 1996)。例如，使用硫酸纤维素(Cellufine sulfate)的亲和柱色谱法被广泛使用，因为它可以实现狂犬病病毒(RABV)抗原的高回收率(Kulkarni, Sahai, Gunale, & Dhere, 2017)。

15. 制剂配方（Formulation） 

疫苗接种的目的是产生强烈的免疫反应，提供长期的感染保护。一般而言，灭活疫苗会配以相对较高剂量的抗原，以确保终产品的高效价(Habel, 1973)。通常会添加佐剂，因为灭活疫苗无法扩增抗原(Montomoli et al., 2011)。大多数用于人类的狂犬病疫苗不含佐剂。含佐剂的动物用狂犬病疫苗通常以液体形式提供，而供人使用的疫苗则以冻干和液体两种形式提供。人用与兽用狂犬病疫苗区分的关键特征见表14.2。

理想的狂犬病疫苗应能启动辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡且高效的免疫反应以实现病毒清除(Ren et al., 2010)。铝盐是灭活动物狂犬病疫苗制造中常用的佐剂，用以提高其效力。铝盐虽然安全且耐受性良好，但会诱导强烈的Th2偏向性反应，并且是一种相对较弱的佐剂。此外，基于铝盐的佐剂在使用上有限制，因其不能进行冻干或冷冻。新型疫苗制剂是极其需要的，因为目前使用的狂犬病疫苗需要配制数微克量的抗原，并且需要多次接种才能诱导延迟出现的病毒中和抗体(VNA)反应，同时伴有较弱的细胞免疫。一种有效的佐剂可以使狂犬病疫苗更有效，并允许通过减少接种次数实现剂量节约，以更低的成本更快地产生抗体反应。在这方面，诸如Toll样受体(TLR)配体和纳米颗粒等新型佐剂为狂犬病疫苗的配制带来了希望(Asgary et al., 2016; Montaner et al., 2012; Wijaya et al., 2017; Zhang et al., 2016)。

（注：表格中缩写含义：IM=Intramuscular injection（肌肉注射）；SC=Subcutaneous injection（皮下注射）；ID=Intradermal injection（皮内注射）；BPL=Butanol-Phenol（丁醇-苯酚）；BEI=Benzimidazolone Ethylene Imine（二乙烯亚胺）；BSA=Bovine Serum Albumin（牛血清白蛋白））

表14.2 的英文原版：

TABLE 14.2 Comparison of tissue culture derived human and veterinary rabies vaccines.

一种胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(ODN)与铝佐剂联合使用时，优先激活了表达TLR9的大淋巴细胞。这种组合通过诱导增强的抗体滴度和Th1细胞免疫反应，在犬体内起到了强效佐剂的作用(Ren et al., 2010)。类似的组合使小鼠的暴露后预防(PEP)接种从五剂减少到三剂成为可能。它还用较低剂量的疫苗保护了小鼠(Yu et al., 2018)。一种非CpG ODN (IMT504)允许减少接种次数，显著节约疫苗剂量，快速产生抗体并提供保护(Montaner et al., 2012)。一种基于免疫刺激复合物(ISCOM)的Matrix-M Vet佐剂被证明能够在使用较低疫苗剂量的情况下激发体液和细胞免疫反应。使用Matrix-M Vet佐剂（瑞典Isconova公司）配制的犬猫用狂犬病疫苗（Rabix和Rabifel）已在俄罗斯上市（俄罗斯VetBioChem公司）。绿色合成的银纳米颗粒已与狂犬病疫苗在动物中联合测试，结果显示其是安全的(Asgary et al., 2016)。一种TLR3佐剂PIKA，一种稳定的双链RNA化学类似物，可增强针对狂犬病疫苗的体液和细胞免疫。在健康成人中进行的1期研究中测试加速接种程序时，其耐受性良好，且比市售狂犬病疫苗免疫原性更强(Wijaya et al., 2017)。然而，只有通过大量适当的临床研究，才能确认此类佐剂是否能提高当前高效救命狂犬病疫苗的可及性。

（未完待续）

相关文章的链接：

权威的大型学术专著《狂犬病（Rabies）》最新版已面世　（https://mp.weixin.qq.com/s/7v3fyBpGaHqHUZbZgPc3fw）

人用及兽用狂犬病疫苗(1) 2026-03-13

人用及兽用狂犬病疫苗(2) 2026-03-15

人用及兽用狂犬病疫苗(3) 2026-03-17

人用及兽用狂犬病疫苗(4) 2026-03-19

人用及兽用狂犬病疫苗(5) 2026-03-22

人用及兽用狂犬病疫苗(6) 2026-03-24

人用及兽用狂犬病疫苗(7) 2026-03-25

人用及兽用狂犬病疫苗(8) 2026-03-29