Proteinase K

国际站：Proteinase K

中文名：蛋白酶K

CAS：39450-01-6

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：蛋白酶 K（蛋白酶 K）是一种非特异性丝氨酸蛋白酶，可用于蛋白质的一般消化。蛋白酶 K 在存在 SDS 或尿素的情况下以及在广泛的 pH (4-12)、盐浓度和温度范围内具有活性。蛋白酶K可用于病毒核酸提取、检测方法的推广^{[1][2][3][ 4]}。

体外：蛋白酶 K 酶可用于破坏 MTX 和 BSA 之间的酰胺键以及 BSA 结构中的酰胺键^[2]。指南（以下是我们推荐的方案。此方案仅提供一个指南，应根据您的具体需求进行修改）。蛋白酶K具有优异的蛋白质降解特性，可用于直接从接种的病毒转运培养基（VTM）中检测SARS-COV2病毒成分，无需提取RNA^[3]。SARS-CoV2 rRTPCR 检测方案^[3]：1.将每个 SARS-COV2 样本的 VTM 分别分入三个 EP 管中（每管 45 μL );2.加入2.5 µL（20 mg/mL浓缩）蛋白酶K（PK），使PK终浓度~1 mg/ml VTM；3.25℃孵育5分钟;4.60℃孵育15分钟；5.98℃孵育10分钟，4℃保存；6.提取的RNA 5μL作为模板进行rRTPCR检测；7.使用BIORAD CFX96™ Real-Time Thermocycler进行rRTPCR检测，阳性标准阈值循环（Ct）值小于40。蛋白酶K提高均质化效果和阳性痰样本的提取率，并增加从中提取的核酸浓度^[4]。nu 的方案甲型流感病毒（IAV）核酸提取^[4]：1.将标本分入3个EP管中（每管500 μL）；2.加入500 μL 0.4 mg/mL Proteinase K buffer，涡旋20秒；3.55℃孵育25分钟，每5分钟涡旋5秒；4.使用自动核酸提取仪提取RNA通过顺磁珠法（中国上海之江生物科技有限公司）用200μL样品进行酸提取系统；5.评估纯RNA产品的A260/A280比值，标准范围为1.8至2.0 .

参考文献：[1]. W Ebeling, et al. Proteinase K From Tritirachium Album Limber. Eur J Biochem . 1974 Aug 15;47(1):91-7.[2]. Nosrati H, et al. Multifunctional nanoparticles from albumin for stimuli-responsive efficient dual drug delivery. Bioorg Chem. 2019 Jul;88:102959.[3]. Shukla A, et al. Vitality of Proteinase K in rRTPCR Detection of SARS-CoV2 Bypassing RNA Extraction. Front Cell Infect Microbiol. 2021 Nov 3;11:717068. [4]. Yu F, et al. Comparative Evaluation of Three Preprocessing Methods for Extraction and Detection of Influenza A Virus Nucleic Acids from Sputum. Front Med (Lausanne). 2018 Mar 2;5:56.