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Cell Metabolism：不饿不吐不反弹，PrRP甩掉一身肥肉（上）

已有 309 次阅读 2026-9-12 23:03 |个人分类:代谢精读|系统分类:科研笔记

Cell Metabolism：不饿不吐不反弹，PrRP甩掉一身肥肉（上）

初稿 | 吴世林

校对 | 陈芳芳胡敏

小编注 | 陈芳芳胡敏吴世林

排版 | 吴世林

编辑 | 孟美瑶

背景介绍

随着基于肠促胰素的疗法的出现，研发安全有效的肥胖症治疗方法取得了重大进展。这些药物最初是为改善胰岛素分泌、用于治疗2型糖尿病而设计的，但研究表明，它们在减轻体重方面也具有显著疗效，甚至对非糖尿病患者也有效。肠促胰素类似物在减重疗效方面的主要作用是减少能量摄入，这种作用很可能是通过激活中枢神经系统中的受体来实现的，这些受体通常对大脑中天然内源性胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的分泌作出反应。肠促胰素类似物能显著减轻体重，通常被认为是安全的，尽管存在一些胃肠道不良反应的问题，包括恶心，但这些问题有望得到解决。减肥的一个主要问题在于，随着时间的推移，很难维持减重效果，因为新陈代谢会发生适应性变化，导致能量消耗降低，以抵消脂肪减少带来的影响。遗憾的是，由于存在安全问题，通过药物手段提高能量消耗的尝试通常都以失败告终（小编注：在本文中，作者引用了3篇文献，分别是①Regulatory Toxicology and Pharmacology，2007；②Int J Obes (Lond)，2012；③Curr Atheroscler Rep，2016。描述了人类在通过药物提高能量消耗（减重）的历史上，尝试过的3种核心途径：线粒体解偶联剂、甲状腺激素类似物、以及β-肾上腺素受体激动剂。①线粒体解偶联剂——DNP。它能破坏线粒体内膜两侧的质子梯度，使得氧化磷酸化脱节。将原本应该用于合成ATP的能量，全部转变成热能释放，从而剧烈消耗脂肪和糖类。但是，当DNP的使用剂量稍大时，线粒体产生大量的热量无法散发，会导致服药者发生致命性的恶性高热，体温可飙升至43℃以上。最终导致体内蛋白直接因高温变性，患者最后只能在极度痛苦中死于多器官功能衰竭。此外，它还会引发严重的白内障和骨髓抑制。因此，该药在1938年被美国宣布为“极度危险”并全面禁用，至今仍是地下违禁减重药致死的主要原因。②甲状腺激素类似物——天然甲状腺激素（T3/T4）能显著提高基础代谢率，促进产热和脂质分解。为了避免其对心脏的毒性，科学家开发了特异性激活甲状腺激素受体β的类似物，试图只加速代谢而不影响心脏。结果显示，虽然它们在降低胆固醇、提高能量消耗方面疗效显著，但在临床试验中，大多都呈现出了软骨毒性、肝毒性或无法完全避免的心脏副作用。③β2肾上腺素受体激动剂——福莫特罗，传统上主要被用于治疗哮喘，但它同时能激活脂肪和肌肉组织上的受体，通过提高交感神经兴奋性来增加静息能量消耗并促进脂肪氧化。文献中提到福莫特罗能使男性的静息能量消耗显著增加超过10%，并大幅提高脂肪利用率。然而，这种激活会不可避免的带来心悸、反射性心率加快、肌肉震颤以及低钾血症等问题）。因此，临床上仍然需要寻找能够作用于能量平衡一方或双方的安全替代方案。

无论是小鼠还是人类，只要携带G蛋白偶联受体（GPR10；基因名称PRLHR）的突变，均表现出早发性肥胖（小编注：对小鼠来说，从1月龄（4–6周龄）断奶早期开始显现、并在2–3月龄（8–12周龄）完全确立的肥胖，就可以算作早发性肥胖）GPR10已知的唯一配体是催乳素释放肽（PrRP；基因名称Prlh），它属于一个更大的RF-酰胺肽家族，该家族在跨物种的进食相关行为中发挥着保守作用。当PrRP被注射到啮齿类动物的大脑中时，会导致食物摄入量减少，这一效应依赖于GPR10。在能量负平衡状态下，Prlh的表达呈下调，而小鼠中Prlh基因的缺失也会导致肥胖表型。综合来看，这些研究结果表明，PrRP在体重的稳态调控中发挥着重要作用。PrRP在大脑中表达，已有研究表明，表达PrRP的两种不同的神经元群体与体重减轻有关：脑干中的PrRP神经元介导进食反应，包括肠道产生的饱腹因子胆囊收缩素的抑制食欲作用；而下丘脑中的PrRP神经元则介导脂肪组织产生的瘦素的产热效应。研究表明，PrRP/GPR10信号传导系统可能同时影响能量摄入和能量消耗，这一观点因人类中发现与肥胖相关的受体突变而得到印证，这使得该系统成为开发新型肥胖治疗方法的潜在靶点。（小编注：PrRP/GPR10系统的生理效应与体内催乳素的产生和分泌并没有直接或必然的联系。在早期的研究中，确实发现PrRP能够特异性地结合GPR10并剂量依赖性地刺激催乳素的分泌。但是在后面的研究中，有研究者在活体动物中注射PrRP或全身性敲除PrRP/GPR10后，发现动物的血清中催乳素水平并没有发生预期的剧烈波动，反而引发了显著的自发性早发性肥胖和代谢紊乱。这说明PrRP/GPR10系统主要是为了控制机体的能量平衡，而非调节催乳素的分泌。研究显示，PrRP/GPR10的核心效应是作为下丘脑调节体重、能量摄入和脂肪氧化的代谢平衡轴：①在Garron等人的研究中，证明了PrRP神经元在介导能量消耗中的核心地位。在下丘脑DMH脑区中存在一群特异性的PrRP神经元，它们是中枢瘦素信号触发机体产热作用所必需的。当该传导系统因人类罕见突变而中断时，突变体无法维持正常的静息能量消耗和脂肪氧化，导致机体即使在摄入相同热量的情况下，能量消耗也会自发性降低，直接引发体重增加；②在Catherine等人的研究中，则揭示了PrRP抑制食欲的下游分子机制，即PrRP的厌食效应是通过激活中枢的促肾上腺皮质激素释放激素受体来介导的。一旦人类的GPR10受体发生突变导致信号失活，这条“饱食信号通路”就会被切断。下游CRH神经元无法被正常激活，机体便失去了对食物摄入的抑制“刹车”，临床上表现为过度摄食和饱腹感延迟。③在Fleur等人的研究中，他们找到了最直接的遗传学印证证据。他们在人类肥胖患者中筛查到了一种破坏GPR10细胞信号传导的罕见人源变异。当研究者在小鼠模型中体内敲入或模拟这一整套人类突变缺陷时，小鼠同样自发性地表现出了明显的体重增加和肥胖。这直接证明了：人类中发现的GPR10突变具有明确的致病功能性。参考文献：[1] Garron T. Dodd, et al. Cell Metabolism，2014. [2] Catherine B. Lawrence, et al. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2004. [3] Fleur Talbot, et al. Nature Communications, 2023.）

有研究指出，经修饰的PrRP肽通过全身给药可降低啮齿动物的体重。这些类似物的设计目的是延长肽在循环系统中的半衰期。然而，其作用机制（包括它们是否能穿透血脑屏障）尚不明确。尽管有报道称棕榈酰化类似物能减少食物摄入量，但这种作用似乎较为短暂，并且有研究发现该作用似乎是由于脱靶效应所致。在此，研究者报告了一种PrRP类似物——化合物NN501，该化合物对饮食诱导性肥胖（DIO）小鼠的食量影响有限，但对脂肪酸氧化具有显著影响。NN501所达到的减重效果与基于肠促胰素的治疗相当，且两者在作用机制上具有协同增效的潜力。NN501不会引起任何明显的胃肠道不良反应，也不会导致瘦体重流失。其作用既依赖于GPR10，也依赖于神经肽FF受体2（NPFFR2）。研究者还提供了证据，表明NN501能够进入大脑，且其作用的中枢机制可能需要通过臂旁核（PBN）和丘脑底旁核（PSTN）的通路。

拓展阅读催乳素释放肽（PrRP）催乳素释放肽（PrRP）基因于1998年首次克隆，由cDNA编码的前前体蛋白产生了至少两种长度不同的PrRP亚型：PrRP31和PrRP20；PrRP的效应主要通过GPR10受体介导。GPR10在大脑中广泛表达，主要集中于与食物摄取及能量稳态调节相关的区域；GPR10基因敲除（KO）小鼠削弱了PrRP的这一作用进一步说明了其作为受体的重要性.也有研究人员在体外发现PrRP-20和PrRP-31对NPFFR2（GPR74）受体具有亲和力及激动活性，推测PrRP可能在体内通过NPFFR受体发挥信号作用。后续有研究人员在清醒大鼠中侧脑室注射PrRP，引起动脉血压和心率升高，该效应可被NPFF受体特异性拮抗剂RF9所阻断。值得注意的是，这些心血管效应在GPR10功能缺失的OLETF大鼠中仍然存在，表明PrRP通过NPFFR2依赖机制在啮齿动物中导致动脉血压和心率升高。上述体内及体外数据提示，PrRP的某些脑内效应经由NPFF受体（可能主要是NPFF2）介导。有研究报道，给自由活动的大鼠注射不同剂量的PrRP，会导致其夜间食物摄入量依赖性减少，并且在配对喂养实验中，研究人员发现即使控制在摄食量一致的情况下，接受PrRP治疗的小鼠体重依然较低，于是推测PrRP可能不仅影响食物的摄入。本文用了多个证据说明NN501对小鼠的摄食量影响较小，主要的机制不是通过减少摄食， NN501注射后RER持续降低，说明机体持续转向脂肪氧化供能，并且在用脂肪酸氧化抑制剂（Etomoxir）之后，NN501的效果被逆转。文章的作者可能想提出一条不依赖抑制食欲的减重途径，这对于那些对GLP-1药物不耐受（如恶心、呕吐）的患者来说，可能是一个有价值的替代方向。

参考文献：
[1] Lawrence,et al. Nat Neurosci.
[2] Engström M, et al.The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics.
[3] Ma L, et al. Eur J Neurosci.
[4] Lawrence, C. ,et al. Nat Neurosci.

敲黑板啦！

1. RF-酰胺受体为肥胖治疗提供了新的潜在靶点

2. 一种对PRLHR和NPFFR2受体有亲和力的修饰型PrRP肽使体重减轻

3. 食物摄入量略有减少，且停药后未出现反弹

4. 其主要作用在于促进脂肪酸的持续氧化

研究结果

1、PrRP类似物NN501的制备及其对体重的影响

初步内部调查发现，palm11-PrRP31在pH 7.4附近溶解度不足，注射后可能引起局部刺激。将位于N端附近的两个精氨酸残基和一个额外的丝氨酸残基替换为谷氨酸，从而得到了一种溶解度更高的肽（小编注：这种替换是基于电荷调控和水合作用增强的理性分子设计，将多肽链上水合能力欠佳的碱性或中性氨基酸，替换为水合能力更强的酸性氨基酸。这一过程类似于引入“内置的电荷和水合增强剂”，通过增强静电排斥和提升水合作用来抵消棕榈酸修饰带来的疏水性，最终在生理pH附近实现了更好的溶解特性。后续通过比较改造肽与天然肽的EC50值来验证功能是否保留。EC50反映了多肽激活受体所需的半数有效浓度，若改造肽的EC50与天然肽相近，说明氨基酸替换没有显著影响其与受体的结合及激活能力，即功能基本保留。另外，这一替换位于N端附近，而PrRP31的受体结合核心区位于C端，理论上也支持功能不受影响的判断。但是EC50仅反映体外效能，更完整的功能验证还需要下文小鼠体内的药效学实验的支持）。此外，易氧化的蛋氨酸被正亮氨酸取代，从而合成了NN0489-0501（简称NN501；图S1A和S1B）。图S1C汇总了天然PrRP、palm11-PrRP31和NN501（以及相关RF-酰胺肽NPFF和RFRP3）对GPR10、NPFFR2和NPFFR1的体外活性。Palm11-PrRP31和NN501既是GPR10又是NPFFR2的强效激动剂，而天然PrRP主要激活GPR10。（小编注：在拓展阅读中提到前面已经有文献报道，天然的PrRP和NPFFR2具有亲和力及激动活性，但是亲和力比较低，并且PrRP20和PrRP31的短血浆半衰期阻碍了这些神经肽的潜在应用。于是研究人员对PrRP进行脂肪酸化改造。PrRP的脂质化可稳定该肽，促进其经外周给药后的中枢效应，并增强其与受体GPR10以及神经肽FF（NPFF）受体NPFF-R2的亲和力。（Karnošová A, et al. In Vitro Study. Int J Mol Sci.）根据这篇文献中研究筛选脂化的PrRP方法显示（Alexopoulou, F., et al. Sci Rep.），与先前关于C16-γE-脂化 PrRP31类似物的报告一致，GUB02647（类似物1）对GPR10同样具有很强的活性（EC50 0.3 nM），但对NPFF2R的活性较弱（EC50 147 nM）。接下来，研究人员进行了一项全面的结构-活性关系（SAR）研究，旨在评估肽链延长对GPR10和NPFF2R激活的影响。首先，将C16替换为C18二酸（C18DA）脂肪酸，从而得到GUB03060。其次，通过进行扩展脂化扫描并随后测定GPR10和NPFF2R的功能活性，研究了PrRP31肽主链上的最佳脂化位点。对经体内表征的肽类脂质链、连接子及序列的概述。（a）本研究中使用的脂质链[C16、C18、C18-二羧酸（C18DA）]和连接子[γ-谷氨酸（γE）、OEG-OEG]。（b）经体内表征的PrRP31类似物序列概览。图中列出了各化合物针对GPR10和NPFF2R活性的EC50值，以及在DIO小鼠中的减重功效（相对于基线值的百分比）。

也有研究人员通过表达利用GPR10、NPFF-R2或NPFF-R1的CHO-K1细胞进行验证，发现palm11-PrRP31显著增加了细胞外信号调节激酶（ERK）、蛋白激酶B（Akt）以及环腺苷酸响应元件结合蛋白（CREB）的磷酸化水平。并且palm11-PrRP31并未在表达NPFF-1R的细胞中激活c-Jun N端激酶(JNK)、p38、c-Jun、c-Fos或CREB通路。（Karnošová A, et al. In Vitro Study. Int J Mol Sci.））

图S1 | NN501化合物的开发以及NN2220的长期给药可降低体重和食物摄入量

2、NN501可减轻体重，且停药后体重反弹速度较慢

中枢PrRP可减少食物摄入并增加能量消耗，但Prlhr（GPR10）基因突变小鼠的肥胖主要归因于能量消耗减少。在DIO小鼠中，每日皮下（s.c.）给药NN501，持续28天，可导致小鼠体重呈剂量依赖性（500-4,000 nmol/kg）下降（体重减轻幅度最高达23% ± 1%；图1A和1B），同时对食物摄入量影响较小（图1C）。治疗结束时，体重逐渐增加，但在最高剂量组中，停药28天后，小鼠的体重仍未恢复至治疗前的水平。此外，未观察到进食量出现暴食性反弹反应。注射NN501可导致能量消耗反复出现急性升高，这种升高与全身性药物暴露水平相一致，并在昼夜周期内保持平衡（图1D和S1D）。然而，从首次注射开始，呼吸熵（respiratory exchange ratio，RER）就出现了显著下降，且这种下降趋势在随后的整夜及次日均持续存在（图1E）。RER是二氧化碳产生量与氧气消耗量之比，用于衡量小鼠正在利用哪种能量来源。通常，夜间活动的小鼠在觅食时，主要利用碳水化合物作为能量来源，其RER在食用普通饲料时接近1.0，但在食用高脂肪饮食时则介于0.8至0.9之间。在此，NN501导致RER显著降低，这表明脂质氧化而非碳水化合物氧化进一步持续增加（图1F）。

这些结果与长效GLP-1类似物NN2220的作用形成鲜明对比，该药物在化学结构和疗效方面与司美格鲁肽几乎完全相同（图S1E-S1G）。与其他GLP-1受体激动剂（GLP-1RA）一样，小鼠表现出由食欲减退引起的体重快速下降。此外，在停用NN2220后，小鼠表现出急性贪食性反弹，并伴随体重的迅速回升（图S1E）。为了进一步了解这两种药物在作用效果上的差异，研究人员在同一项实验中对比了它们的高剂量和低剂量的效果（图1G）。治疗至第28天时，低剂量的NN501和NN2220分别导致体重下降了5%±2%和7%±2%，而高剂量组则分别导致体重下降了15%±2%和18%±3%（图1G和1H）。接受任何剂量NN2220治疗的小鼠均表现出摄食量减少，且在停止治疗后出现进食量反弹（图1I）。相比之下，接受NN501治疗的小鼠进食量变化不大；停药后，这些小鼠体重恢复的速度较慢，且未出现贪食反应。因此，接受较低剂量NN2220和NN501治疗的小鼠分别在8天和13天后恢复到基线体重，而接受较高剂量治疗的小鼠则分别在17天和25天后恢复到基线体重。在亚慢性NN501治疗中观察到的起效和恢复较慢，可能源于其对食物摄入量的影响相对较小，包括停药后未出现反弹现象。研究人员认为，NN501对食物摄入量的影响较小，这可能反映了其作用的受体类型，因为天然PrRP经中枢注射时具有强烈的GPR10依赖性厌食作用。

图1 | 在DIO小鼠中长期给予不同剂量的NN501和NN2220，会通过不同的机制导致体重减轻

3、PrRP类似物对脂肪的利用具有持续作用

在另一项实验中，研究人员通过将一组接受DIO饮食的小鼠与接受NN501的小鼠进行配对喂养，证实了这种修饰的PrRP类似物并非仅通过减少食物摄入量来影响体重（图2A）。研究人员发现，配对喂养组仅在前5天与NN501处理组的体重减轻幅度相当，之后便开始体重回升。已发表的研究结果表明，其他棕榈酰化类似物可减少食物摄入量，但对能量消耗无显著影响。在他们的实验中，研究人员发现连续10天每天2次注射palm11-PrRP31会导致体重下降（剂量为2,500 nmol/kg），但对食物摄入量几乎没有影响（图S2A和S2B）。然而，正如NN501处理结果所示，每次注射palm11-PrRP31都会伴随能量消耗的急剧上升（图S2C），但RER却持续下降（图S2D），这与脂肪酸氧化水平的显著上升相对应（图S2E）。

为了进一步证实NN501对脂质代谢增强具有直接作用，研究人员通过全身注射肉碱棕榈酰转移酶-1抑制剂依托莫昔（小编注：Etomoxir在该实验中被用作CPT1抑制剂，其主要作用是限制长链脂肪酸通过carnitine shuttle进入线粒体进行β氧化。具体来说，长链脂肪酸需要先被活化为长链acyl-CoA，再经CPT1催化生成长链酯酰肉碱，随后才能跨越线粒体膜并进入β氧化）来阻断脂肪酸氧化。结果发现，如果每天同时进行皮下（s.c.）和腹腔（i.p.）注射，所有小鼠都会出现轻微的、与应激相关的体重下降。然而，接受腹腔注射溶剂的小鼠，在30分钟后再接受皮下注射NN501，其体重出现显著下降（第7天时下降约7%；图2B）。如前所述，小鼠对NN501的反应表现为RER降低（表明脂肪利用率更高）以及能量消耗增加（图2C-2E）。研究者发现，单独使用依托莫昔（10 mg/kg，腹腔注射）对这些指标并没有影响，但它逆转了NN501对体重、脂肪酸氧化和能量消耗的影响。为了确定哪些外周组织可能驱动NN501的全身代谢效应，研究人员在使用NN501治疗7天后处死小鼠，并通过qPCR对参与无效能量消耗的若干经典基因进行评估。结果发现，腹股沟白色脂肪组织中Dgat和Atp5k的表达显著下降，这可能表明甘油三酯的合成和/或脂质循环有所减少（图S2F）。相比之下，研究者观察到Ucp1和Ckb在腹股沟脂肪和附睾脂肪中的表达均有所增加，尽管这些变化未达到统计学意义（图S2F和S2G）。这表明白色脂肪组织可能正在发生褐变，且无效肌酸循环有所增加，这与冷刺激后观察到的情况相似。这些结果共同表明药物对周围组织产生了影响，因此有必要对这些组织在不同治疗时长后的情况进行全面研究。

有趣的是，由于PrRP类似物全身给药的主要作用机制似乎与GLP-1RA不同，因此二者之间可能存在协同作用。已发表的啮齿类动物研究数据表明，司美格鲁肽等GLP-1受体激动剂（GLP-1RAs）的减重作用主要归因于其抑制食欲的作用，但也包含对能量消耗的次要影响，且研究显示这种影响在体重减轻后仍然得以维持。这表明司美格鲁肽的作用机制与通过饮食干预实现的减重并不相同。为了进一步探讨GLP-1RA与PrRP类似物在代谢适应方面的差异，研究者分别单独或联合注射了NN501或NN2220的亚最佳剂量，持续14天，随后进入洗脱期。结果发现，单独使用任何一种治疗药物均可降低体重，且体重会在治疗结束后5天内恢复（图2F）。而两种药物联合使用后产生了协同作用，使体重下降了约12%。这一效应在为期5天的洗脱期内并未得到逆转。单独给药时，NN2220（而非NN501）对食物的摄入量产生了显著影响（图2G）。在每种情况下，体重的变化均源于脂肪质量的减少，而非瘦体重的减少（图S2J）。无论是单独使用这些剂量的药物，还是联合使用，均未对能量消耗产生显著影响（图S2K）。当同时给予这两种药物的亚有效剂量时，RER明显降低，脂肪利用率明显升高（图S2L和S2M）。由于此研究仅使用了单次给药浓度，因此无法确定这两种类似物在联合使用时是否存在真正的协同作用。需要通过使用各种不同的药物剂量来研究联合治疗的潜力。

图2 | NN501对体重的长期影响是通过增加脂肪利用实现的

图S2 | NN501和palm11-PrRP31的代谢效应

4、NN501不会引起任何严重的不良反应

为了进一步研究该药物对食物摄入量的轻微影响，并检测是否存在明显的不良反应，研究人员对受试鼠进行了单次NN501药物注射，以评估其对其他指标的影响。首先，研究者给自由进食的C57BL/6J雄性小鼠进行了NN501药物处理，并记录其在夜间的食物摄入量。结果发现，NN501导致这些小鼠的摄食量出现轻微但具有统计学意义的下降，这种效应持续了约1小时（图3A）。随后，研究人员又对WT小鼠和同窝Prlhr基因敲除小鼠进行NN501药物处理。由于该受体缺失的突变体容易发展为肥胖，因此这个实验是在年轻小鼠（8-12周龄）身上进行的。同样，NN501导致WT小鼠的摄食量出现轻微但显著的下降（小编注：NN501摄食效应较弱，可能反映了NN501系统给药实际激活的受体和神经环路不同。内源性PrRP中枢注射会导致较强的GPR10厌食效应。NN501外周给药后，虽然可以进入部分脑区，但其激活模式不同于中枢给药的内源性PrRP，可能包含GPR10之外的NPFFR2作用，甚至可能有外周组织作用），但在Prlhr基因敲除的同窝小鼠中并未观察到这种现象（图S3A）。接下来，研究人员试图确定NN501是否因引发恶心等不良反应，还是因导致胃轻瘫而减少食物摄入量。然而，根据双瓶条件性味觉回避试验的结果显示，NN501既未引起厌恶反应（图3B），也未影响胃排空，通过对乙酰氨基酚试验也证明了这一点（图3C）（小编注：对乙酰氨基酚试验是一个经典的、用来间接评估胃排空速度的方法。它的原理是用对乙酰氨基酚作为“标记物”，通过追踪它在血液中的出现速度，来反映药物是否影响了食物从胃进入小肠的快慢。对乙酰氨基酚在小肠的吸收效率极高，因此，它出现在血液中的速度，基本就完全受制于胃将药物排入小肠的速度，当胃排空很快时，对乙酰氨基酚会迅速进入小肠，导致血液中的药物浓度快速上升，峰值会更高，且峰值出现得更早。反之，若胃排空被药物等因素延缓，药物进入血液的进程就会被拖慢，血液中的浓度也会相应降低）。最后，研究人员通过采用尾套法检测发现，单次给药NN501确实导致平均动脉压（MAP）的轻微升高（图3D）（小编注：尾套法（tail-cuff method）是一种用于无创测量清醒小鼠动脉血压的常用实验技术。实验前，研究人员对小鼠进行至少2周的驯化，使其适应操作和束缚管。实验时，将小鼠放入束缚管中，在约33-34°C的加热平台上，使用CODA尾套式血压监测系统（Kent Scientific，美国）对小鼠进行血压测量并记录。）。这一效应在他们的预料之中，因为目前的研究表明PrRP的中枢注射会升高平均动脉压。然而，为了确定该药物是否会对血压产生长期影响至关重要，研究人员对小鼠连续13天每天注射NN501，并在第5、9和13天测量了它们的血压。在药物治疗的第5天，研究者仍观察到平均动脉压（MAP）有轻微升高。然而，这一效应在药物治疗的第9天和第13天时已完全消失（图S3B）。