狂犬病毒：结构、组成、感染循环和生命周期(5)

(Rabies virus: Structure, composition, infection cycle and life cycle)

前记: 

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第2章是《Rabies virus(狂犬病毒）》。

现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第2章　狂犬病毒(5) 

Rabies virus

2. 狂犬病毒结构(Rabies virus architecture)（续） 

2.3 狂犬病毒蛋白(Viral proteins )（续）

2.3.1 核蛋白（Nucleoprotein，N）

RABV巴斯德病毒株（PV）的N蛋白包含450个氨基酸，其中第389位的丝氨酸残基（S389）发生磷酸化，分子量为57 kDa。RABV中的N似乎由细胞酪蛋白激酶II（casein kinase II）进行磷酸化（Anzai et al., 1997; Gupta et al., 2000; Wu, Lei, & Fu, 2003）。在丽沙病毒属（lyssaviruses）中，N的氨基酸序列是病毒蛋白中最保守的（Marston et al., 2007; Warrilow, Smith, Harrower, & Smith, 2002）。尽管N整体上具有保守性，但在不同基因型之间的N基因短片段内存在相对较高的遗传多样性（Bourhy et al., 1999; Bourhy, Kissi, & Tordo, 1993; Conzelmann, Cox, Schneider, & Thiel, 1990; Johnson, McElhinney, Smith, Lowings, & Fooks, 2002; Kissi, Tordo, & Bourhy, 1995; Kuzmin, Hughes, Botvinkin, Orciari, & Rupprecht, 2005）。N中特定区域氨基酸序列高度保守的一个重要原因是，它必须保留某些依赖于特定蛋白与RNA基因组相互作用的关键功能（见第2.3.2节）。另一方面，这些氨基酸差异为N提供了独特的、基因型特异性的抗原表位（epitopes），这些表位基于与一组抗N单克隆抗体（MAbs）的反应模式（抗原性），定义了基因型内和基因型间的抗原关系（Dietzschold, Lafon, et al., 1987; Flamand, Wiktor, & Koprowski, 1980a, 1980b; Smith, 1989）。利用N基因在核苷酸水平上的定性多样性，也导致了对丽沙病毒系统发育关系的广泛分析，并提出了使用聚合酶链反应（PCR）和核苷酸测序技术定义丽沙病毒物种的定量标准（Kuzmin et al., 2005）（见第4章和第12章）。

N与其vRNA相互作用的结合位点已被定位于N的C端和N端区域，其中氨基酸残基149、161、168、225、235、237、290、298、323、352和434参与了直接的RNA结合（Kouznetzoff, Buckle, & Tordo, 1998）。结合vRNA后，N会发生足够的构象变化，从而获得多个构象依赖性抗原表位，其中之一使得N的Ser389能够被磷酸化（Anzai et al., 1997; Dietzschold, Lafon, et al., 1987; Kawai et al., 1999; Toriumi & Kawai, 2004）。N Ser389的磷酸化稳定了狂犬病病毒RNP复合物中N与P之间的相互作用（Toriumi & Kawai, 2004）。还有研究表明，N在vRNA或互补病毒RNA（cRNA）衣壳化过程中的磷酸化对于调节vRNA的转录和复制很重要（Liu, Yang, Wu, & Fu, 2004; Wu, Gong, Foley, Schnell, & Fu, 2002; Yang, Koprowski, Dietzschold, & Fu, 1999）。

在RABV蛋白中，N是仅次于G被研究得最广泛的蛋白，涉及其抗原性和免疫原性结构与功能。对N的免疫学兴趣源于观察到RABV的RNP能在动物中诱导针对致死性狂犬病病毒外周攻击的保护性免疫（Dietzschold, Wang, et al., 1987; Tollis, Dietzschold, Volia, & Koprowski, 1991）。N上的三个线性抗原表位（抗体结合位点）被定位在氨基酸358至367（抗原位点I），另外三个线性抗原表位（抗原位点IV）被定位在两个独立区域，即氨基酸359至366和375至383（Goto et al., 2000; Minamoto et al., 1994）。尽管氨基酸残基359至366这一段序列是独立的抗原位点I和IV所共有的，但识别这些位点内表位的单克隆抗体（MAbs）在结合N抗原时并不相互竞争。因此，似乎这些各自的表位是在N的不同形式上被检测到的，一种代表在细胞质中弥散分布的N，另一种则与病毒RNP相关联（Goto et al., 2000; Jiang et al., 2010）。N与胞质内包涵体（IBs）或内基氏小体（NBs）（Lahaye et al., 2009）相关联可能代表了N的成熟形式，这一点由一种针对抗原位点II的单克隆抗体所暗示，该抗体仅识别与IB相关的N抗原上的构象特异性表位。这些以及存在于抗原位点II和III中的构象依赖性表位，还有N-RNA磷酸化位点（丝氨酸389）处的表位，以及尚未定位但已有单克隆抗体可用的其他表位，都提供了宝贵的诊断工具（Kawai et al., 1999; Lahaye et al., 2009; Minamoto et al., 1994）。

N也是在狂犬病及狂犬病相关病毒之间发生交叉反应的T辅助细胞（Th）的主要靶点（Celis, Karr, Dietzschold, Wunner, & Koprowski, 1988; Celis, Ou, Dietzschold, & Koprowski, 1988; Ertl et al., 1989）。利用一系列对应于约15个氨基酸长度N序列的重叠合成肽，鉴定并定位了RABV N中的几个Th细胞表位（Ertl et al., 1989）。此外，RABV N还发挥外源性超抗原（superantigen）的功能（Lafon et al., 1992）。它或许是人类中唯一被鉴定出的病毒超抗原。不仅在人类中，甚至在小鼠中发现的一些归因于RABV N作为超抗原的特性和反应包括：（1）在人类疫苗接种者中强力激活外周血淋巴细胞；（2）在注射灭活狂犬病疫苗后产生更迅速且增强的病毒中和抗体（VNA）反应；（3）诱导早期T细胞活化步骤，以及CD4+ Vb8 T细胞的扩增和动员，以触发和支持VNA的产生；（4）其与细胞表面表达的HLA II类抗原结合的能力（Lafon et al., 1992）。

（未完待续）

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