在细胞培养和生物制药生产中，支原体检测是各国药典强制要求的质控项目。然而，面对市面上众多的商品化qPCR检测试剂盒，如何选择一款真正靠谱的产品？2025年，法国赛诺菲研究团队在Molecular Therapy: Methods & Clinical Development上发表了一项研究，他们在开发自建qPCR方法的过程中，对多款市售支原体qPCR检测试剂盒进行了系统对比。这篇论文中的发现，恰好为选择试剂盒提供了有价值的参考。

一、支原体检测的难点：物种多样性超出想象

各国药典（美国药典USP<63>、欧洲药典EuPh 2.6.7、日本药典JP18）均要求支原体检测方法能够覆盖药典列出的所有支原体物种，包括口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、莱氏无胆甾原体等。技术上的难点在于，不同支原体物种的16S rRNA基因序列存在显著差异。赛诺菲团队在开发方法时发现，莱氏无胆甾原体（A. laidlawii）的16S rRNA序列与其他物种差异极大，单一探针根本无法覆盖，最终需要设计两条探针——一条用于绝大多数支原体物种，另一条专门用于A. laidlawii，在同一反应管中联合使用才能实现全检测覆盖。

这个细节揭示了一个重要事实：即便是跨国药企的专业研发团队，也需要花大量精力来确保检测覆盖所有药典要求的物种。对于大多数实验室而言，自行开发并验证这样一套方法不仅技术门槛高，而且需要投入大量时间和资源。

二、市售试剂盒的性能差异有多大？

赛诺菲团队将六款市售支原体qPCR检测试剂盒与其自建方法进行了系统对比，评估维度覆盖检测技术、法规合规性、内部控制和成本。以下是论文中的关键发现：

在检测性能方面，多数试剂盒的检测限（LOD）均能达到药典要求的<10 CFU/mL，但并非所有试剂盒都同时符合USP、EuPh和JP18三大药典的要求。在检测原理方面，采用水解探针法的试剂盒比SYBR Green法具有更高的特异性——探针提供了第二层特异性保障，能有效避免因非特异性扩增导致的假阳性。赛诺菲团队在实际样本验证中就遇到了这一情况：某商品化试剂盒对一份CHO细胞样本报告支原体阳性，而探针法qPCR和测序结果均证实，该样本实际污染的是藤黄微球菌（一种常见环境细菌），并非支原体。

在内部控制方面，部分试剂盒缺少内部阳性对照（IPC）或区分性阳性对照（DPC），这使得在出现异常结果时，无法快速判断是PCR抑制、操作失误还是真正的污染。而在成本方面，市售试剂盒的价格从1,200欧元到4,100欧元不等，差异悬殊。

三、从论文结论看选购要点

综合赛诺菲团队的对比研究，选择支原体qPCR检测试剂盒时，建议关注以下几个要点：

第一，检测覆盖范围是否足够广。单靠一条探针可能无法覆盖所有支原体物种——赛诺菲团队发现A. laidlawii需要单独设计探针就是最好的例证。

第二，检测原理是否可靠。水解探针法（TaqMan探针）比SYBR Green法的特异性更高，能有效降低假阳性风险。对于重要的放行检测，探针法是更稳妥的选择。

第三，质控体系是否完善。试剂盒是否包含内部阳性对照（IPC）以监控PCR抑制？是否提供阳性对照以验证试剂有效性？这些看似细节的配置，在GMP环境中至关重要。

第四，合规性是否明确。试剂盒是否声称符合USP、EuPh或中国药典的要求？检测限是否达到10 CFU/mL？这些指标直接关系到检测结果是否能被药监部门认可。

四、自建方法还是商品化试剂盒？

赛诺菲团队最终选择了自建方法，主要原因有两个：一是成本优势——自建方法每批次仅需约100欧元，而市售试剂盒价格甚至可达4,100欧元；二是质控自主可控。但必须看到，赛诺菲作为跨国药企，拥有专门的分子生物学研发团队来设计、优化和验证检测方法，这是大多数实验室和生产企业不具备的条件。

对于绝大多数细胞培养实验室和生物制品生产企业而言，选择一款经过充分验证、覆盖范围广、质量控制完善的商品化支原体qPCR检测试剂盒，是更为实际和高效的解决方案。

上海翼和生物支原体qPCR检测试剂盒

采用水解探针法qPCR技术，采用多对引物探针检测范围覆盖120种支原体，灵敏度可达10 CFU/mL，配备完整的对照体系，操作便捷，数小时即可获得检测结果。适用于细胞系日常监测、生物制品放行检测和血清等原材料的入厂质控。

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参考文献：

Dos Santos S, Lespinasse E, Bonnet B, Basmaciogullari S. Simple, specific, rapid, and pharmacopoeia-compliant qPCR approach for the detection of mycoplasma in biopharmaceuticals. Mol Ther Methods Clin Dev. 2025 Aug 20;33(3):101572. doi: 10.1016/j.omtm.2025.101572. PMID: 40969677; PMCID: PMC12441703.

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