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小鼠诺如病毒MNV的qPCR检测方法

已有 87 次阅读 2026-1-14 18:24 |个人分类:大小鼠病原体检测|系统分类:科研笔记

中国实验动物学会2017年5月发布的团标T/CALAS 22—2017 实验动物 小鼠诺如病毒检测方法描述了小鼠诺如病毒的检测方法。标准规定了小鼠诺如病毒(MNV)的检测方法、试剂等本标准适用于小鼠诺如病毒的检测。其中方法上包括ELISA、普通PCR、实时荧光定量PCR等方法。

 

小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )生物学特点

GB14922—2022 《实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测》中规定的免疫缺陷鼠中必须排除的病毒。小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus,  MNV ) 也是目前实验小鼠中感染率较高的一种病毒,有些实验动物设施的感染率非常高MNV会激活免疫系统,影响抗体检测小鼠诺如病毒是国标中免疫缺陷小鼠的必检项目。

小鼠诺如病毒属于杯状病毒科 诺如病毒属,与人源诺如病毒的生物学及遗传相似。2003年该病毒从小鼠中发现,后来受到越来越多的关注,关于诺如病毒感染的研究也逐步受到重视。鼠的MNV能通过接种细胞进行增殖,但是人类诺如病毒不能通过细胞培养增殖。MNV基因组长约7.5kb,为正义单链RNA。

 

小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )感染后的影响

大部分实验小鼠对此病毒易感,虽然普通小鼠受感染无明显发病症状,但可出现短暂、轻度的生长迟缓。但是实验小鼠感染了MNV可能对实验结果产生一定影响或偏倚,轻则食欲,也可能影响繁殖特别是免疫缺陷的小鼠感染后可能会导致小鼠死亡而且可出现按持续性感染,持续数月,通过粪便排毒,引起大范围感染

感染后可影响免疫能力,破坏免疫及代谢研究结果通过影响基因表达等因素影响药效、毒理评估等。

 

小鼠诺如病毒 ( Murine Norovirus, MNV )的检测方法

传统的病毒检测用 ELISA 的方法检测病毒抗体,但是由于 ELISA 的方法容易出现抗体交叉反应导致出现假阳性,并且对于免疫缺陷小鼠来说无法产生相应的抗体,所以需要有新的检测方法来完成病毒的检测。并且核酸病毒的增殖比抗体出现的时间更早,更易于早发现、早处理。

翼和生物开发了小鼠诺如病毒的qPCR荧光定量检测试剂盒,该试剂盒中HEX通道可鉴定样本是否感染了小鼠诺如病毒MNV。检测流程:一般采集粪便或者其他样本用翼和DNA/RNA共提取试剂盒提取诺如病毒RNA,提取好的核酸直接取样5微升进行上样检测。PCR检测过程中需要设置阴性对照NTC和阳性MNV对照,确保检测的流程没有出现假阳性和假阴性。因为翼和的提取试剂盒中含有内参质控品(外源基因组),可以质控整个提取过程,所以在最终的检测数据中CY5通道可以看到扩增曲线。

该试剂盒灵敏度高,特异性强,成本降低,操作简单。

 

 



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