甲基丙烯酰化明胶（GelMA）由于具有生物兼容性好、可见光固化的特点，已广泛应用于细胞3D培养、组织工程、生物3D打印等研究领域，已有上万篇学术论文中采用了GelMA水凝胶。EFL团队研制的GelMA产品具有批次稳定、服务专业等优点，自推出以来，已服务哈佛、剑桥、麻省理工、香港理工、清华、北大、浙大、上交、华西、九院等国内外高校及医院的数百个课题组，EFL团队整理了GelMA使用的高频问题，可供参考。

Q1：1g GelMA可以配多少溶液？

答：EFL推荐使用的常用工作液浓度为5%-10%（w/v），1g可以配10-20mL工作溶液，送引发剂。

Q2：GelMA怎么保存？固体-20℃，配成溶液-4℃吗？我放在-4℃冰箱里，发现溶液固化了，是不是变性了呀？

答：无菌GelMA液体可以放4度保存，凝固是因为冷凝了，加热即可恢复。GelMA储存条件如下：干燥固体：-20℃，避光，6个月内有效。无菌溶液：4℃，避光，7天内有效；-20℃，避光，3个月内有效。GelMA溶液建议现配现用，多次反复冻溶无法保证固化品质。GelMA溶液具有温敏性，低温形成可逆的物理凝胶，室温或冰箱冷藏避光保存时凝胶化属于正常现象，加热即可恢复溶液状态。

Q3：GelMA溶解后是有点稠的液体，能过滤么？过滤损耗大吗？高浓度过滤会不会很费劲啊？有没有其他的灭菌方式啊？能121℃高温高压灭菌吗？

答：可以过滤，可用0.22微米无菌过滤头过滤除菌。过滤损耗与浓度成正比，同一型号GelMA溶液过滤，浓度越高损耗越多，常用的5% (w/v)浓度过滤损耗率＜10%。常规5%（w/v）浓度优先选0.22um过滤除菌，高浓度不易过滤的可以选择巴氏灭菌，GelMA属于多肽类不能121℃高温高压灭菌会变性。

Q4：GelMA的取代度有哪些型号？在GelMA表面接种细胞，应该选什么型号的GelMA？如果把细胞混到GelMA里做三维培养，又应该选什么型号的GelMA？

答：EFL目前有氨基取代度为30%、60%和90%三种固定型号的GelMA，均有现货。GM30、GM60和GM90均可应用于细胞培养，同等条件下，取代度越高，固化后的水凝胶强度越强。每种细胞的最适取代度和最适强度均有所不同，建议您先用三个型号的水凝胶分别做一下预实验，筛选最适合的型号、浓度及固化条件。在所有型号GelMA的表面接种细胞效果都很好；对于细胞混GelMA里做三维培养的型号选择上，EFL常用型号及使用参数推荐如下：5%GM30（w/v），EFL-LS-1601便携式固化光源光照30-60s。5%GM60（w/v），EFL-LS-1601便携式固化光源光照15-22s。

Q5：哪种型号的GelMA适合用于动物实验啊？

答：各型号都可应用于动物实验，具体选用的型号和浓度要根据实验需求来选择，需要GelMA降解的慢就用高浓度高取代度，反之相反；如果是载细胞实验要同时考虑所需细胞效果的条件。

Q6：用GelMA负载外泌体或者ECM做细胞培养可以吗？能固化吗？有推荐的型号吗？

答：可以的。EFL有很多客户做相关研究，调整好添加物与GelMA的比例固化没有问题，具体型号要看您对强度的需求以及细胞的特性。GM30、GM60和GM90均有客户使用，您可以先做预实验找出适合自己细胞的条件。

Q7：将GelMA铺在载玻片或者培养皿上，固化以后明胶就会粘在基底上，有什么方法可以避免明胶粘在基底，或者尽量减少粘附力？

答：可以使用EFL的防粘膜。如果您是做细胞3维培养可尝试EFL的3维培养定制的固化环套装，可改善细胞在胶内的生长状态，便于后期表征操作。

Q8：请问怎么从GeMA中提取细胞做WB和PCR呢？

答：您可使用EFL的GeMA裂解液(货号：EFL-GM-LS-001)来降解GelMA提取细胞，GeMA裂解液可在0.5-2h内快速降解GelMA并能较好的保持细胞的完整性和活性。

Q9：为什么我3D打印的GelMA网格载细胞支架有一面细胞长的好，有一面长的差呢？不是应该整个支架都长的差不多吗？

答：EFLers实践经验表明，支架放在板孔中培养，贴板底侧没有上表面长的好，支架在培养基中悬浮培养，则整个支架细胞生长无明显差异。您可将打印好的载细胞支架置于EFL自主研发的固化环3D细胞培养辅具上培养，可使支架整个悬浮在培养基中，增强支架内细胞的物质代谢，改善您所遇到的问题。

Q10：为什么我同一次实验做出来的胶块里面，有的胶块细胞长的好，有的胶块细胞长的不好啊？

答：您好！这可能与您的固化操作有关。您在固化过程中，需保持固化条件一致，光强、光照距离和光照时间相同。推荐您使用EFL自主研发的EFL-LS-1601便携式固化光源，该光源对比传统的手电筒光源，具有光强稳定，光照距离固定，光照时间可控等优点，可以很好的消除样本间制作的差异性。