RT_PCR为本课题组常用实验技术。

逆转录的费用比较高，我们如下安排实验：

首先配制buffer dNTP oligo-dT RNA等等，然后再配制酶。这样基于两个考虑，第一：便于热处理RNA，去除二级结构；第二：第一步地加入对浓度要求更高，而酶则相对差一些，即多加一点酶没有太大影响。

 

首先，将加样器调到样本到数目稍多一点，比如做12个，则调到12.1ul，然后加入buffer 4次，dNTP和oligo-dT各一次（当然预先配制也可以），这样配成了十二个样本所需到mix，然后每个均分6ul即可； 水的加入，一般可以分两次，第一次在本步骤，第二次在酶的加入，因为单纯配制酶则很浪费。

 

然后是RNA定量加入每个管子（当然RNA已经被提前稀释为1ug/ul）； 热处理（此步骤可以省略）。

 

最后，加入酶于侧壁，离心即可。

 

基本原则：

1 mix

2 用一把枪，或者同一个公司的。 如果枪足够准另当别论。

3 浓度的本质 是比例，所以用一把枪，或buffer配制依照此原则。

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