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论文赏析:甲基化与循环肿瘤细胞(CTC)相结合检测肝癌

已有 1757 次阅读 2023-4-24 16:41 |系统分类:论文交流

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https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fgene.2022.1065693/full

Liang W, Xu Z, Kong F, Huang X, Xiao Y,Zhou W, Ye S and Ye Q (2022),

Circulating tumour cell combined with DNA methylation for early detection of

hepatocellular carcinoma.Front. Genet. 13:1065693.doi: 10.3389/fgene.2022.1065693

1、目的:

本文通过循环肿瘤细胞(CTC)计数和甲基化检测相结合提高肝癌检测效果。

2、概要:

方法和结果



病例

疑似肝细胞癌(HCC)患者

17

对照

肝硬化(HBV-DeCi)患者

11

样本

5ml血液/人,从中分离循环肿瘤细胞和血浆


CTC分析

手术前采集血浆,制备CTC,通过Diff染色进行CTC计数

记录CTC数

qMSP分析

对血浆cfDNA进行 甲基化特异性qMSP分析,GNB4和Riplet为靶基因,β-actin为内标基因

记录Ct值

数据分析

将CTC数据与甲基化检测数据相结合(靶基因GNB4/Riplet),分析与1-3期肝细胞癌的关联性。

ROC分析

结果

CTC单独对HCC检测的敏感性和特异性分别为70.6%和90.9%(AUC=0.81)。

CTC与甲基化结合后,AUC值显著增加至0.98,敏感性为88.2%,特异性为100%。


结论

CTC计数+GNB4/Riplet甲基化检测可用于肝细胞癌的早期诊断。


3、循环肿瘤细胞(CTC)的分离与染色

5毫升血样——含8%PFA 375μl的生理盐水稀释到15毫升——静置10分钟——用CTCBIOPSY®装置(武汉友芝友医疗科技有限公司)分离CTC(滤膜孔径8微米)——膜上捕获的细胞进行Diff染色。

 

4、CTC认定标准

1)细胞核形状:不典型,不规则,呈结节状或小叶状等。

2) 核质比:大于0.8;

3)细胞长直径:>15μm;

4)细胞核着色:过度和不均匀;

5) 核膜:增厚,凹陷和褶皱;

6)核仁大或细胞核分裂异常。

捕获的异常细胞满足上述6条标准中的4条,或满足第6条标准和其他任何2条认定为CTC;

满足第6条标准以外的3条,或仅满足第6条标准,认定为疑似CTC。

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