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论文赏析：甲基化与循环肿瘤细胞（CTC）相结合检测肝癌
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https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fgene.2022.1065693/full
Liang W, Xu Z, Kong F, Huang X, Xiao Y,Zhou W, Ye S and Ye Q (2022),
Circulating tumour cell combined with DNA methylation for early detection of
hepatocellular carcinoma.Front. Genet. 13:1065693.doi: 10.3389/fgene.2022.1065693
1、目的：
本文通过循环肿瘤细胞（CTC）计数和甲基化检测相结合提高肝癌检测效果。
2、概要：
方法和结果 | ||
病例 | 疑似肝细胞癌（HCC）患者 | 17例 |
对照 | 肝硬化（HBV-DeCi）患者 | 11例 |
样本 | 5ml血液/人，从中分离循环肿瘤细胞和血浆 | |
CTC分析 | 手术前采集血浆，制备CTC，通过Diff染色进行CTC计数 | 记录CTC数 |
qMSP分析 | 对血浆cfDNA进行 甲基化特异性qMSP分析，GNB4和Riplet为靶基因，β-actin为内标基因 | 记录Ct值 |
数据分析 | 将CTC数据与甲基化检测数据相结合（靶基因GNB4/Riplet），分析与1-3期肝细胞癌的关联性。 | ROC分析 |
结果 | CTC单独对HCC检测的敏感性和特异性分别为70.6%和90.9%（AUC=0.81）。 CTC与甲基化结合后，AUC值显著增加至0.98，敏感性为88.2%，特异性为100%。 | |
结论 | CTC计数+GNB4/Riplet甲基化检测可用于肝细胞癌的早期诊断。 |
3、循环肿瘤细胞（CTC）的分离与染色
5毫升血样——含8%PFA 375μl的生理盐水稀释到15毫升——静置10分钟——用CTCBIOPSY®装置（武汉友芝友医疗科技有限公司）分离CTC（滤膜孔径8微米）——膜上捕获的细胞进行Diff染色。
4、CTC认定标准
1）细胞核形状：不典型，不规则，呈结节状或小叶状等。
2） 核质比：大于0.8；
3）细胞长直径：>15μm；
4）细胞核着色：过度和不均匀；
5） 核膜：增厚，凹陷和褶皱；
6）核仁大或细胞核分裂异常。
捕获的异常细胞满足上述6条标准中的4条，或满足第6条标准和其他任何2条认定为CTC；
满足第6条标准以外的3条，或仅满足第6条标准，认定为疑似CTC。
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