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C2C12细胞分化

已有 15786 次阅读 2018-5-25 01:39 |系统分类:科研笔记

 

小鼠成肌细胞;C2C12
细胞名称   小鼠成肌细胞;C2C12 
形态特性    成纤维细胞样;梭形  
生长特性   贴壁生长  
特征特性    该细胞株是Yaffe D, Saxel O建立的小鼠成肌细胞系的亚株。该细胞分化较快,可形成能收缩的微管,产生特异的肌肉蛋白。在骨形态形成

蛋白(BMP-2)的作用下,该细胞可由成肌细胞分化为成骨细胞。检测发现该细胞鼠痘病毒阴性。 
培养条件    DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20%FBS;4mM glutamine   
传代方法    维持细胞浓度在1.5~10×105 viable cells/75 cm2;2~3天换液1次。 
传代情况   C5 
冻存条件    基础培养基+5%DMSO+20%FBS  
支原体检测   培养法(-)  
STR    - 
同工酶    
染色体    69~77 
使用权限   A类 

进口试剂耗材:保证统一后,统计问题沟通较准确,也有统计意义。以下疑问可沟通

细胞代数:各实验室换算方法不一,有按复苏后开始算。也有从国外订购来开始算,一般实验室按复苏后开始算。

细胞密度:70-90% 传代或加入分化培养基,实验统计:交流:细胞融合到100%,是不是会有叫接触抑制(密度抑制)停止生长。思考:100%加入分化培

养基是否合适。换液1-2天内。(有做细胞融合100%的老师可来信告知结果)

刚开始进行实验时,建议设立的是诱导了 4天、6天、8天、10天、12天 这几个时间点观察,每天显微镜观察 细胞形态 拍照存图

分化后不能传代,用诱导的培养基继续养

细节:换fusion medium后,细胞还会继续生长。所以,不是在长满后换FM,而是在长到70%左右就换FM。
换FM后,每24小时换液一次,一定要预热medium,沿壁加入,避免冲起细胞。
尽可能在大dish里养,在plate上容易漂起。
根据细胞状态不同,融合3~4天就可形成myotube
不一定三天就可以分化,第五天才分化也可以
而相互接合是这个细胞去分化的最大的原因

相关细胞问题思考:3T3-L1为啥要用小牛血清会比胎牛好。
raw264.7细胞遇到不好试剂耗材就会长角,与C2C12细胞分化培养基是一个道理吗?我们统计过有的老师养这株细胞长角后的试剂耗材没更换,最后也到细长的状态了。

总结:细胞保种很重要。

 



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