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重组PCR原理

已有 10827 次阅读 2008-12-28 09:30 |个人分类:课堂集锦|系统分类:科研笔记

重组PCR应用是非常广泛的,原理:两个基因或者说一个启动子和一个基因,将他们连接到一起,首先想到的方法当然是借助于酶切的方法,但有时我们并不一定能构找到合适的酶切位点,难道没有别的办法了吗?那就是重组PCR技术。举个例子可能更容易说明。比如两个基因,一个命名为A,一个命名为BA序列5-atgcatgctagctagaacgctacgctgactaccccctgatc-3B的序列为5-atgctagtagctagccccccccaggggataattttttaaaacg-3。首先我们要设计引物,假设引物的序列为:

A1:5-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3
A2:5-ggggggctagctactagcatgatcagggggtagtcagcgt-3

B1:5-acgctgactaccccctgatcatgctagtagctagcccccc-3
B2:5-cgttttaaaaaattatcccct-3
仔细的观察上面的引物A2B1,会发现这两条引物要比另外两条引物长很多,在设计引物的时候在A23端加入了20B基因5端的序列,在B15端加入了20A基因3端的序列。重组PCR的步骤:
1)以A1,A2扩增A基因,B1B2扩增B基因
2)回收AB基因
3)以AB为共同的模板,A1B2为引物,扩增A+B

引自:http://bbs.genecool.com/thread-19024-1-1.html



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