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重组PCR的应用是非常广泛的,原理:两个基因或者说一个启动子和一个基因,将他们连接到一起,首先想到的方法当然是借助于酶切的方法,但有时我们并不一定能构找到合适的酶切位点,难道没有别的办法了吗?那就是重组PCR技术。举个例子可能更容易说明。比如两个基因,一个命名为A,一个命名为B。A的序列为5-atgcatgctagctagaacgctacgctgactaccccctgatc-3,B的序列为5-atgctagtagctagccccccccaggggataattttttaaaacg-3。首先我们要设计引物,假设引物的序列为:
A1:5-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3
A2:5-ggggggctagctactagcatgatcagggggtagtcagcgt-3
B1:5-acgctgactaccccctgatcatgctagtagctagcccccc-3
B2:5-cgttttaaaaaattatcccct-3
仔细的观察上面的引物A2和B1,会发现这两条引物要比另外两条引物长很多,在设计引物的时候在A2的3端加入了20个B基因5端的序列,在B1的5端加入了20个A基因3端的序列。重组PCR的步骤:
(1)以A1,A2扩增A基因,B1,B2扩增B基因
(2)回收A,B基因
(3)以A,B为共同的模板,A1和B2为引物,扩增A+B。
引自:http://bbs.genecool.com/thread-19024-1-1.html
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