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Ⅲ型呼肠孤病毒的qPCR检测方法

已有 395 次阅读 2026-6-21 10:41 |个人分类:大小鼠病原体检测|系统分类:科研笔记

型呼肠孤病毒的生物学特点和感染后的症状

 

呼肠孤病毒(Reovirus,Reo)是人兽共患病毒,感染多种动物型呼肠孤病毒Reo-3也就是呼肠孤病毒3(Reo3)呼肠孤病毒科的正呼肠孤病毒属的代表株。病毒粒子具有二十面体对称双层衣壳结构,成熟病毒无包膜,大小约75nm。病毒基因组双股RNA(dsRNA)

 

呼肠孤病毒除了感染啮齿动物和禽外,一般不引起明显的疾病特点是对成年动物Reo-3在动物群体中通过空气和粪-口途径传播鼠类能自然感染Reo3,其临床表现为黄疸、运动失调以及油性被毛、生长发育迟缓等能引起包括坏死性肝炎、心肌炎、胰腺炎以及脑膜炎等疾。实验鼠机体器质性损伤、免疫稳态紊乱,同时严重干扰药理、肿瘤、免疫、病理类动物实验数据,是SPF级实验鼠房重点管控病原。呼肠孤病毒3型是实验动物SPF级大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠的必检项目之一,定期进行Reo-3检测是预防和控制鼠群中Reo-3感染的重要手段

 

 

呼肠孤病毒3的检测方法

 

目前针对Reo3的检测方法主要有酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)和免疫酶试验(IEA)以及RT-PCR方法,这些方法在Reo3的临床检测中发挥了一定的作用PCR的检测方法特别是qPCR的检测方法在Reo3的检测中发挥了越来越重要的作用。

有研究发现,Reo3的核酸在Reo3感染的早期就可以被检测到,随后持续几天后检测呈阴性,但是抗体却是在感染18天后才能被检测到。因此,核酸PCR检测能够比抗体检测ELISA更早的发现Reo3的存在。

检测流程包括核酸RNA的提取,逆转录,扩增,数据判读等。样本加入相应的裂解液后进行研磨,加入溶菌酶和蛋白酶K加热,预处理后,进行核酸提取。随后对核酸样本进行逆转录,再进行PCR扩增检测。通过Ct值来判断样本是否感染了阳性病毒。

荧光定量PCR检测方法具有快速、高灵敏度和高特异性的优点,在动物病原体的临床的快速检测中应用广泛。翼和生物提供的SPF大鼠小鼠病毒检测试剂盒能够快速的检测到Reo-3病毒,试剂盒检测引物探针与其它病毒均无扩增反应,具有良好的特异性。

并且试剂盒本身含有逆转录酶,无需单独进行病毒的逆转录。试剂盒中的阳性对照含有内参,搭配提取试剂盒可对提取和扩增过程均进行质控。

试剂盒灵敏度高、扩增稳定性高、重复性强适合实验动物中心作为一种快速的动物筛查试剂盒。

 



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