转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）超家族是一类能调节炎症和纤维化反应的细胞因子，它能激活丝氨酸/苏氨酸激酶受体磷酸化受体调节型Smad蛋白（Smad2/3），后者与Smad4形成复合物并入核调控靶基因转录，是纤维化、细胞外基质重塑及上皮/内皮－间充质转分化（EMT/EndoMT）研究的核心通路，其中Smad3被认为是介导促纤维化效应的关键效应分子。SIS3（AbMole，M8149）是一种Smad3抑制剂：SIS3（CAS No.：521984-48-5，AbMole，M8149）以微摩尔量级的IC50（约3 μmol/L）抑制Smad3磷酸化，为解析TGF-β/Smad3信号提供了经典工具分子。

在Mv1Lu肺上皮细胞的p3TP-lux报告基因体系中，SIS3（AbMole，M8149）剂量依赖性地抑制TGF-β1 诱导的转录活性；免疫沉淀分析显示其阻断Smad3的C端磷酸化及其与Smad4的相互作用，而对Smad2磷酸化无显著影响。在真皮成纤维细胞中，SIS3（CAS No.：521984-48-5，AbMole，M8149）可抑制TGF-β1诱导的I型前胶原表达与肌成纤维细胞分化，并完全消除硬皮病来源成纤维细胞中组成性的Smad3磷酸化与细胞外基质过度表达。

在体内研究中，SIS3（AbMole，M8149）被广泛用于多种纤维化造模的干预验证。例如有研究在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病模型中发现，小鼠肾组织中Smad3磷酸化持续升高，经渗透压微泵给予2.5 mg/kg/day的SIS3（CAS No.：521984-48-5，AbMole，M8149）8周，可显著抑制糖基化终末产物驱动的内皮－间充质转分化（EndoMT），减少肾间质肌成纤维细胞蓄积与胶原Ⅳ、纤维连接蛋白沉积，延缓小鼠早期糖尿病肾病进展。还有文献在博来霉素（Bleomycin）诱导的小鼠肺纤维化模型中也观察到了SIS3对Smad3活化与肺组织纤维化程度的抑制作用。

除纤维化领域外，SIS3（AbMole，M8149）还被发现可逆转ABC转运体介导的多药耐药表型。有研究证实0.1–0.7 μmol/L的SIS3（CAS No.：521984-48-5，AbMole，M8149）即能显著逆转ABCB1（P-糖蛋白）与ABCG2介导的底物外排，其机制与刺激转运体ATP酶活性（对ABCB1与ABCG2的EC50分别约160 nmol/L与60 nmol/L）、增加Calcein AM与Pheophorbide A（脱镁叶绿酸 A）等底物在细胞内的蓄积有关，且该效应独立于Smad3信号。

作为Smad3的经典抑制剂，SIS3（AbMole，M8149）在TGF-β信号解析、器官纤维化造模干预以及ABC转运体功能研究中均有广泛应用。

参考文献及鸣谢

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[2] Itoh Y, Sawaguchi T, Fu H, et al. Indole-derived compound SIS3 targets a subset of activated Smad complexes. J Biochem, 2023, 173(4): 283-291. DOI: 10.1093/jb/mvac104.

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[5] He H, Wang H, Chen X, et al. Treatment for type 2 diabetes and diabetic nephropathy by targeting Smad3 signaling. Int J Biol Sci, 2024, 20(1): 200-217. DOI: 10.7150/ijbs.87820.

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细胞实验参考

细胞系：Mouse NIH3T3 embryonic fibroblast cell line

方法：Cells were activated into cancer-associated fibroblasts by K7M2 osteosarcoma-conditioned medium; expression levels of α-SMA and FAP (CAF activation markers) were detected by Western blotting and immunofluorescence staining; phosphorylation status of Smad3 was analyzed to evaluate TGF-β/Smad3 pathway inhibition efficacy; collagen gel contraction assay, wound healing assay and transwell migration assay were performed to assess cell functional phenotypes

浓度：5 μM

处理时间：48 h for protein expression detection and collagen gel contraction assay; 24 h for wound healing and transwell migration assays

参考文献：Biomaterials. 2025 Jan;412:223564

上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

动物实验参考

动物模型：Male db/db mice (C57BLKS background), 4 weeks old, spontaneous type 2 diabetes mellitus with diabetic nephropathy model

配制：Dissolved in DMSO first, then diluted in 0.9% sodium chloride solution supplemented with 0.1% DMSO and 5% Tween 80 for intraperitoneal injection

剂量：1.25, 2.5, 5 mg/kg

给药处理：Intraperitoneal injection, once daily for 8 consecutive weeks, initiated at 4 weeks of age (pre-diabetic stage)

参考文献：Cell Death Dis. 2022 Jul 12;13 (7):609

上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

体内实验的工作液，建议现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。切勿一次性将产品全部溶解。

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