ITS-X（Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine，AbMole，M19989）是一种能用于细胞无血清或者低血清培养体系的添加剂，由胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠与乙醇胺按优化配比组成，可在不添加胎牛血清的条件下，为哺乳动物细胞提供生长所需的激素信号、铁转运、抗氧化与膜磷脂合成支持。ITS-X 是细胞增殖、代谢调控、分化及原代细胞培养研究中替代血清的重要工具。

一、ITS-X的组分构成与作用机理

ITS-X（胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇，AbMole，M19989）属于培养基添加物，由四类功能组分协同构成，各自对应独立的分子通路。其中胰岛素是核心生长因子，通过结合胰岛素受体（IR）激活PI3K/Akt与Ras/MAPK信号通路，促进葡萄糖与氨基酸摄取、脂质合成以及蛋白与核酸的生物合成，从代谢层面驱动细胞增殖与存活。转铁蛋白承担铁的转运功能，它能经细胞膜转铁蛋白受体（TfR1）介导内吞，将胞外的铁递送入细胞，增强血红素、核糖核苷酸还原酶等含铁酶的活性；同时螯合培养基中的游离铁，减少氧自由基与过氧化物的毒性。硒以亚硒酸钠的形式提供硒元素，作为谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、硫氧还蛋白还原酶等硒蛋白的辅因子，构成培养体系的抗氧化防线，维持细胞氧化还原稳态。乙醇胺则是磷脂酰乙醇胺（PE）等膜磷脂合成的前体，参与细胞膜磷脂代谢，对增殖旺盛细胞的膜生物合成至关重要。

上述组分通过激素信号、离子代谢、抗氧化与膜合成四条支路的协同，复现了血清中多种活性因子的功能，是无血清培养基能够支撑细胞长期增殖与功能维持的基础。

二、 ITS-X在无血清培养体系中的应用

ITS-X（Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine，AbMole，M19989）是由胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、乙醇胺组成的培养基复合型营养添加剂，该试剂主要应用于体外细胞培养场景，并不直接用于动物体内实验，是无血清培养体系中使用频率很高的功能性补充组分。在细胞实验中，含胎牛血清的传统培养体系凭借血清中丰富的生长因子、载体蛋白、黏附相关组分，通用性强、容错率高，适合大部分细胞系复苏、快速扩增与常规保种，至今仍是实验室基础培养的主流选择。但血清是成分高度复杂的天然混合物，内部包含数千种激素、细胞因子、脂质、小分子代谢物，不同批次血清之间活性物质含量存在一定的波动，会带来两方面关键问题：一方面，血清内源混杂的信号分子会直接干扰药物干预、信号通路、营养代谢相关机制研究，研究者很难判定细胞表型变化来源于实验处理还是血清本底组分；另一方面，批次差异会造成实验结果重复性下降，同时高丰度血清蛋白也会增加细胞分泌产物后续纯化的难度。正是基于上述问题，在机制解析、原代细胞功能维持、产物制备等特定研究场景，会优先选用化学成分明确可控的无血清培养体系，而ITSX（胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇，AbMole，M19989）就可起到替代血清、补充细胞生存增殖必需营养信号的作用，为细胞提供胰岛素介导的代谢调控、转铁蛋白转运铁离子、亚硒酸钠抗氧化保护、乙醇胺参与细胞膜磷脂合成等关键支持，弥补基础培养基缺少的功能性组分。在肿瘤细胞机制研究中，有研究将DMEM基础培养基搭配BSA与ITS-X（Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine，胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇）构建完全无血清培养条件，用于多种贴壁肿瘤细胞的胆固醇代谢相关实验；由于彻底移除血清自带胆固醇与脂质干扰，该体系可以精准解析胆固醇耗竭处理对肿瘤细胞黏附、增殖行为的影响，避免血清脂质对实验变量的掩盖，培养得到的细胞增殖活力可以和含血清组别达到相近水平。在肌肉前体细胞研究中，针对牛源卫星细胞的体外扩增研究显示，基础无血清培养基中添加1%浓度ITSX，能够显著提升成肌细胞增殖速率；研究者分析认为除胰岛素、转铁蛋白、硒元素的作用外，ITSX 配方中额外添加的乙醇胺，作为细胞膜磷脂合成前体，对维持细胞的膜结构完整性也发挥了正向作用，该条件下可以实现不依赖血清的原代肌细胞体外扩增。在胰岛与内分泌相关原代组织培养领域，ITS-X（（Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine）常被添加至CMRL基础培养基用于胰岛组织的无血清长期培养，脱离血清环境之后，依靠ITSX提供营养，分离得到的大鼠胰岛β细胞可以较长时间维持细胞存活，并且保留葡萄糖刺激胰岛素分泌这一核心生理功能，适合用于糖代谢、胰岛损伤保护的体外机制探究；鸡胚胰腺原基的体外培养同样可以借助含ITS核心组分的无血清体系，有效促进胰岛素阳性内分泌细胞的存活与分化，排除血清内混杂激素对胰腺器官发育表型的干扰，更加真实复现组织本身的发育特征。此外在畜牧细胞培养的相关工作中，ITSX（胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇）也是猪卫星细胞无血清增殖培养基的重要添加剂，和 bFGF、EGF、ROCK 抑制剂等组分协同，在无动物血清条件下支撑肌肉干细胞存活与体外扩增，为细胞培养肉相关的体外模型搭建提供培养基础。

三、 范例详解

Cell Stem Cell. 2025 Mar 6;32(3):409-425.e8. (IF= 23.3)

科研人员在上述文章中构建了滋养层干细胞 TSCs，并诱导其分化为 STB-LCs（合胞滋养层样细胞）与 EVT-LCs（绒毛外滋养层样细胞），并且在实验中使用了 AbMole的ITS-X（Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine，AbMole，M19989）作为培养基添加剂：在 TSC 扩增培养基、STB-LCs 分化培养基以及 EVT-LCs 分化培养基中均添加 1% ITS-X（100 X）；ITS-X为体外培养的滋养层干细胞及其分化子代细胞提供了胰岛素、转铁蛋白、硒等必需营养组分，维持细胞存活与增殖能力，保障滋养层细胞向合胞滋养层、绒毛外滋养层两个谱系正常分化，为后续免疫荧光等细胞表型鉴定提供稳定的细胞模型。

图 1.  4CL blastoids cultivated in a 3D culture system up to day 14

本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

参考文献及鸣谢

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