Rho家族小GTP酶是调控细胞骨架重组、细胞形态维持及细胞运动的核心分子开关，其中RhoA通过激活下游效应蛋白ROCK，促进肌球蛋白轻链磷酸化和应力纤维形成，在细胞收缩、黏附及侵袭中发挥关键作用。Rhosin（G04，AbMole，M7194）是首个被报道的RhoA特异性抑制剂，其设计基于RhoA与其鸟苷酸交换因子（GEF）LARG的相互作用界面，通过竞争性占据RhoA的Switch I/II区域，阻断GEF介导的GDP-GTP交换，从而将RhoA锁定在非活性的GDP结合状态^[1]。Rhosin（CAS No.：1281870-42-5）对RhoA的抑制具有高度选择性，其对RhoA的亲和力较Rac1和Cdc42高50倍以上，这种亚型选择性为区分不同Rho家族成员的功能提供了关键工具^[1]。

Rhosin对细胞骨架的调控效应在多种细胞模型中得到了验证：在NIH 3T3成纤维细胞中，10–50 的μM Rhosin处理30分钟即可观察到应力纤维的解聚和细胞边缘的片状伪足形成增加，同时肌球蛋白轻链磷酸化水平显著降低；Swiss 3T3细胞中，相似浓度可阻断溶血磷脂酸（LPA）诱导的细胞收缩和焦点黏附组装^[2]。HeLa宫颈癌细胞中，25–100 μM Rhosin可抑制ROCK介导的肌球蛋白磷酸化，降低细胞牵引力并减弱基质胶侵袭能力；Rhosin（50 μM）能阻断EGF诱导的MDA-MB-231乳腺癌细胞片状伪足形成和定向迁移，提示RhoA在生长因子驱动的细胞运动中的必要性^[2]。值得关注的是，Rhosin（G04，AbMole，M7194）对细胞增殖的影响相对温和：在多数细胞系中，100 μM以下浓度对细胞周期进程和存活率不会产生明显影响，Rhosin因此已成为研究细胞运动的常用工具^[3]。

在神经科学研究领域，Rhosin的应用拓展了RhoA信号在轴突生长和突触可塑性中的功能相关研究。Rhosin（G04，AbMole，M7194）能在原代海马神经元中促进轴突延伸和生长锥的板状伪足形成，同时抑制生长锥塌陷；此外，在脊髓背根神经节神经元中，10 μM的Rhosin能阻断髓鞘相关抑制因子诱导的生长锥塌陷和轴突再生抑制^[3]。上述这些发现提示RhoA是中枢神经系统损伤后轴突再生障碍的关键调控节点，Rhosin的出现也为视觉神经再生研究提供了干预手段：Rhosin在视网膜神经节细胞中，能促进轴突生长，这为视神经损伤修复研究提供了实验基础^[3]。

动物实验层面的数据进一步支持了Rhosin的体内应用价值：在大鼠主动脉环实验中，Rhosin能显著降低去甲肾上腺素诱导的血管收缩张力，效果与ROCK抑制剂Y-27632相当但机制不同——Rhosin作用于RhoA上游，而Y-27632作用于ROCK下游^[4]。大鼠脊髓损伤模型中，损伤局部注射10 μM Rhosin（每日一次，连续14天）可促进轴突再生并改善后肢运动功能评分；小鼠肿瘤转移模型中，尾静脉注射5 mg/kg（隔日一次，连续3周）可减少肺转移结节数量并降低肿瘤组织中应力纤维相关蛋白的表达^[5]。Rhosin还被用于研究RhoA在胚胎发育、组织纤维化及免疫细胞迁移中的调控作用，其可逆性抑制特性优于基因敲除等不可逆干预手段^[5]。

参考文献及鸣谢

[1] Shang, X.; Marchioni, F.; Sipes, N.; et al. Rational design of small molecule inhibitors targeting RhoA subfamily Rho GTPases. Chemistry & Biology 2012, 19 (6), 699–710.

[2] Ridley, A. J.; Hall, A. The small GTP-binding protein rho regulates the assembly of focal adhesions and actin stress fibers in response to growth factors. Cell 1992, 70 (3), 389–399.

[3] Dergham, P.; Ellezam, B.; Essagian, C.; et al. Rho signaling pathway targeted to promote spinal cord repair. Journal of Neuroscience 2002, 22 (15), 6570–6577.

[4] Sauzeau, V.; Le Mellay, V.; Gilleron, J.; et al. RhoA and RhoA-associated kinase are involved in the formation of actin stress fibers and focal adhesions in 3T3 fibroblasts. Experimental Cell Research 2000, 261 (1), 136–145.

[5] Fritz, G.; Brachetti, C.; Bahlmann, F.; et al. Rho GTPases in human breast tumours: expression and mutation analyses and correlation with clinical parameters. British Journal of Cancer 2002, 87 (6), 635–642.

 细胞实验参考：

细胞系：B16BL6 cells and 4T1 cells (mouse melanoma and breast cancer cell lines)

方法：B16BL6 cells and 4T1 cells were treated with rhosin at indicated concentration for 3 days. Cell viability was assessed by MTT assay. For wound healing assays, MDA-MB-231 and HCC1937 basal-like breast cancer cells were maintained in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) at 37°C, 5% CO₂. Cells were treated with Rhosin hydrochloride (30μM) for 24 hours. Rhosin hydrochloride significantly inhibited cell migration in wound healing assays, reducing migration in MDA-MB-231 and HCC1937 cells. Rhosin hydrochloride suppressed stress fiber formation in MDA-MB-231 cells.

浓度：1-50 µM (for B16BL6 and 4T1 cells); 30 µM (for MDA-MB-231 and HCC1937 wound healing assay)

处理时间：3 days (for B16BL6 and 4T1 cells); 24 hours (for MDA-MB-231 and HCC1937 wound healing assay)

参考文献：Biomedicines. 2021 Jan 4;9(1):35.

* 上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

动物实验参考：

动物模型： C57BL/6J mice (male, 10-12 weeks old) subjected to chronic social defeat stress model

配制： Rhosin was prepared in a 5% DMSO, 0.9% saline solution, gently warmed to dissolve. Vehicle contained a 5% DMSO solution in 0.9% saline.

剂量： 40 mg/kg

给药处理：Intraperitoneally (i.p.) administered 15 min prior to physical defeat. For post-defeat treatment, injections were administered one time per day for 7 days and social interaction was retested on day 8.

参考文献：Biol Psychiatry. 2019 Jun 15;85(12):1001-1010.

* 上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。  体内实验的工作液，建议现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。  切勿一次性将产品全部溶解。

支持单位：