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MCE HP PolyFast转染试剂性能优势、实验方案及常见问题解决方案_ MedChemExpress (MCE)
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Section.01
MCE HP PolyFast
转染试剂
广泛适用，高转染效率
MCE HP PolyFast 转染试剂(HY-K2029) 对于多种细胞类型，包括：HEK293、NIH-3T3、MCF-7、HeLa、A549、HepG2、143B、HCT116、H1299，均能实现高转染效率。
图 1. 用胰蛋白酶消化的细胞在转染前一天以 0.5-1.5 x 105 个/孔的密度接种。
将细胞接种于 24 孔板中，培养至细胞密度达到 50% 后进行后续转染；转染时使用 2 μL HP PolyFast 转染试剂 (HY-K2029) 和 0.5 μg GFP 质粒。转染后孵育 48 小时，在荧光显微镜下观察 GFP 表达以确定转染效率。
转染细胞系：稳定且高效的转染性能
MCE HP PolyFast 转染试剂在所有 8 种测试细胞中均表现出优异的转染效率。
即使在难以转染的细胞中，例如 HUVEC、原代人星形胶质细胞和 Beas-2b，仍然获得了高比例的 GFP 阳性细胞，表明其具有稳定且高效的转染性能。
图 2. 转染 48 小时后，通过流式细胞术定量 GFP 阳性细胞的百分比，以评估转染效率。
细胞毒性低，作用温和
MCE HP PolyFast 转染试剂能较好平衡高转染效率与细胞活力。在 10 种受试细胞系中，转染后的细胞活力均超过 92%。
其在高效递送 DNA 的同时，对细胞活力的影响极小，具有优异的生物相容性。
图 3. 转染 48 小时后，采用 CCK-8 法检测细胞活力，以未转染细胞作为对照。Section.02
还在纠结？对比一下
荧光显微镜
分别使用 MCE HP PolyFast 转染试剂和同类产品，将表达 GFP 的质粒转染至 12 种不同的细胞类型。
荧光对比显示，无论是易转染、中等难度、还是传统上难以转染的细胞系，比如Neurons (神经元)、hNSCshNSCs (人神经干细胞) 和 mBMSCs (小鼠骨髓间充质干细胞)，MCE HP PolyFast 转染试剂都表现出相当或者更优的转染效果。
图 4. 转染 48 小时后，通过荧光显微镜直接观察并比较了 GFP 荧光。
荧光素酶活性检测
同时，对 COS-7、HT-29、A549、MCF-7、HepG2 和 NIH/3T3，6 种细胞系进行了荧光素酶活性的检测。MCE HP PolyFast 转染试剂均实现了显著高于或相当的荧光素酶表达水平。且在 HepG2 细胞中，荧光素酶活性提高了 2.1 倍。
也就是说，在相同的 DNA 输入条件下，MCE HP PolyFast 转染试剂能够实现更高的蛋白质表达水平。
图 5. 转染 48 小时后，使用荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。Section.03
转染方案？安排！
MCE HP PolyFast 转染试剂操作简便、结果稳定可靠、转染后无需去除复合物或更换新鲜培养基。
实验流程
图 6. HP PolyFast Transfection Reagent 转染实验流程图。
以 HP PolyFast 为例的转染方案 (24 孔板)
『细胞准备』
贴壁细胞:
将胰酶消化后的细胞按照 0.5 - 1.5 × 105 个/孔铺板，确保转染时细胞汇合度约为 50%。
悬浮细胞:
转染当天，按照 1 - 3 × 105 个细胞/500 μL进行铺板，在制备转染试剂-核酸复合物之前完成铺板。
备注:
建议使用生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染 (细胞存活率可以使用台盼蓝染色液检测)。
『转染试剂-核酸复合物制备』
取 0.5 μg 质粒加入到 1.5 mL 离心管中，加入 2 μL 转染试剂，轻柔混匀，室温静置孵育 3 min。
向上述混合物中加入100 μL无血清培养基，轻柔混匀，室温静置 30 min，即得到转染试剂-核酸复合物。
注意事项：
① 建议使用无内毒质粒抽提试剂盒进行质粒提取，质粒纯度 A260/A280 在 1.8-2.0 之间。
② 对于 24 孔板，推荐 DNA 用量为 0.2-0.6 μg，转染试剂用量 1-4 μL。初次使用时，建议在推荐范围内进行梯度预实验，确定最佳配比。
③ 转染试剂-核酸复合物在室温下 4 h 内可保持稳定。
表 1. 不同培养体系转染试剂-核酸复合物制备。
『细胞转染』
为准备好的细胞更换新鲜的预热完全培养基 (500 μL/孔) ，随后将制备好的 100 μL 转染试剂-核酸复合物均匀添加到每孔细胞中，轻摇培养板使其混匀。
『转染效果分析』
转染后培养 24-48 h 后，可采用荧光检测法、Western Blot、RT-PCR、ELISA、流式细胞数、报告基因检测等评估转染效果，也可依据质粒设计加入筛选药物，进行稳定细胞株的筛选。
实验Tips：
对于悬浮细胞的转染，在转染 5 h 后，可选择加入佛波醇酯 PMA/植物血凝素 PHA 以提高 CMV 启动子的活性并促进细胞表达。
对于 Jurkat 细胞，PHA 和 PMA 的终浓度分别为 1 μg/mL 和 50 ng/mL，可以提高 CMV 启动子活性和基因表达。
对于 K562 细胞，仅加入 PMA 即可。
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除了 HP PolyFast，MCE 还有一套完整的转染产品矩阵，适用 DNA、RNA 不同类型核酸转染场景：
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转染常见问题及解决方案
转染效率低？
1. 细胞状态：
选择健康、活力高的细胞，生长迟滞或形态异常的细胞建议重新复苏。
2. 细胞密度：
转染当天细胞汇合度需要控制在 40-80% 之间。密度过低会影响细胞接触，过高容易引起接触抑制，让细胞进入 G0/G1 静止期。
注：不同细胞的汇合度不同，建议增加预实验。
3. 传代次数：
建议控制在 50 代以内，连续传代可能导致基因漂移或表面受体表达谱改变，同一细胞株实验应尽量保持代次一致。
4. 核酸质量：
使用高纯度、无内毒素的核酸，进行梯度实验，优化核酸/试剂比例。
5. 复合物形成条件：
转染试剂-核酸复合物使用无血清培养基稀释，并控制孵育时间；操作时应轻柔混匀，避免剧烈震荡。
6. 检测时间不当或启动子不匹配：
设置时间梯度寻找最佳检测时间，更换强启动子 (如 CMV) 或细胞特异性启动子。
细胞毒性大？
1. 试剂毒性大或用量大：
优化试剂/核酸比例。
2. 复合物加入量过大或局部浓度过高：
复合物体积建议不超过培养基总体积的 10-20%，逐滴缓慢加入，并轻轻摇匀。
3. 细胞密度过低：
调整细胞密度至合适范围。
4. 抗生素干扰：
转染时撤除抗生素，转染后再恢复使用。
转染后出现沉淀/絮状物？
1. 混合顺序：
按照说明书建议混合，避免混合顺序错误；
2. 孵育时间：
按照说明书操作，避免孵育时间过长；
3. 核酸溶解：
使用纯水或推荐的无干扰缓冲液稀释，避免稀释液中含有干扰物质 (如高浓度EDTA、高浓度磷酸盐)。
转染结果难重复？
1. 操作细节：
严格标准化操作，减少人为误差。
2. 细胞代次：
使用状态稳定的低代次细胞。
3. 细胞密度控制不均：
确保每次铺板密度均匀一致。
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