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Compartment Saddle Plot分析细节

已有 3846 次阅读 2022-12-8 21:28 |个人分类:Hi-C|系统分类:科研笔记

cooltools saddle命令:

Usage: cooltools saddle [OPTIONS] COOL_PATH TRACK_PATH EXPECTED_PATH

具体运行如下:

cooltools saddle --contact-type cis --strength --out-prefix sample --qrange 0.02 0.98 --fig pdf sample_100000.cool sample_100000.eigs.cis.vecs.tsv sample_100000.exp.tsv

注意:这里cool必须用balance之后的

 

计算步骤如下:

1. 通过cooler.Cooler()载入cool文件 => 赋于变量clr

2. 通过pandas.read_table载入compartment eigs文件(即sample_100000.eigs.cis.vecs.tsv,在程序中这个文件称为track_path),默认读入的列为chrom,start,end,E1 => 赋于变量track

3. 通过make_cooler_view函数(内部调用bioframe.make_viewframe)从cool文件中拿到chromsize。如果提供的--view选项(指定查看的区域),则会仅取这段区域,否则用全部区域来做compartment saddle plot => view_df

4. 对track按染色体分组,之后每组中start最小值和end最大值构建dataframe => track_view_df

5. 结合view_df信息载入expected文件(即sample_100000.exp.tsv,在程序中称为expected_path),载入时内部调用pandas.read_table。默认读入的列为balanced.avg

options:

如果指定--min-dist,当这个值小于0时,min_diag为3,否则为ceil(指定的长度/binsize);同样如果指定--max_dist,当这个值大于0时floor(指定的长度/binsize)

6. 对track做mask,具体将weight为空值的bin,对应的E1也设为空值,在整个过程中还会多次出现mask空值

7. 通过align_track_with_cooler函数,这一步是做track的预处理

 

8. 关键步骤

利用api.saddle.digitize对track进行digitize。即先按vrange和qrange取这列值的大于某个值和小于某个值的区间内的值,再按n_bins对这些值进行分档。

具体代码如下:

digitized[digitized_col] = np.digitize(track_values, binedges, right=False)

测试发现binedges为单调递增的,所以binedges为0的bins属于compartment B,binedges最大的bins属于compartment A

digitize操作可用以下例子理解:

某次考试有100道题,一题1分,这样考试结果为0-100分,为了将这100个分为5个档次,人为的设定0-20分为E档,20-40分为D档,...,80-100分A档。这样每个考生的成绩都被成为A-E 5个档中的一个,这个过程就是digitize。其中均分为5个档,对应n_bins=5

 

digitize示意图如下:

注:输入文件最好所有binsize都一致,可以用100kb、200kb或者400kb,视基因组大小而定

 

9. 关键步骤

采用api.saddle.saddle先转OE矩阵,再对同一个档的互作频率取平均

9.1 转OE矩阵

它的核心步骤先采用_make_cis_obsexp_fetcher(如果是cis)或者_make_trans_obsexp_fetcher(如果是trans)获取OE矩阵,它整合cool matrix和expected结果,获取observed/expected结果,具体如下:

以"chr16"的cis互作为例,reg1_coords和reg2_coords均为('chr16', 0, 53896199),即(染色体名,染色体起始位点,染色体终止位点)

reg1_coords = tuple(view_df.loc[reg1])   

# reg1="chr16", reg1_coords=('chr16', 0, 53896199)

 

reg2_coords = tuple(view_df.loc[reg2])

# reg2="chr16", reg2_coords=('chr16', 0, 53896199)

 

observed matrix通过以下方式获得:

obs_mat = clr.matrix(balance=clr_weight_name).fetch(reg1_coords, reg2_coords)

这里observed matrix是balance之后的矩阵,可以通过以下命令看到,balanced值中会有一些空值,这些在程序中也是有处理的

 

expected matrix通过以下方式获得:

exp_mat = toeplitz(expected[reg1, reg2][: obs_mat.shape[0]])

expected数据格式如下:

{('chr16', 'chr16'): array([nan, nan, 0.03315045, ..., 0.00093574, 0.00171282, ...]), ("chr17", "chr17"): array([nan, nan, 0.03460911, ..., 0.00219353, 0.00286887, ...]), ...}

array中的值为expected文件balanced.avg列的值

toeplitz是from scipy.linalg import toeplitz载入的,该矩阵描述如下:托普利兹矩阵,简称为T型矩阵,托普利兹矩阵的主对角线上的元素相等,平行于主对角线的线上的元素也相等;矩阵中的各元素关于次对角线对称,即T型矩阵为次对称矩阵。以下是wiki上的解释:

再获取OE矩阵,即obs_mat / exp_mat

以后也可以利用这种方法来获取单染色体OE矩阵,进而从其中提取出每个区段上的子矩阵

 

生成OE矩阵的方法如下示意图:


9.2 采用_accumulate函数对PC1在横纵坐标同一个档的元素做sum和数目计数,具体作法如下:

 

    for i in range(n_bins):   # bin数目循环,对应x轴

        row_mask = digitized[reg1] == i   

        # PC1 digitized列表中,分档后的值为i的那些行

 

        for j in range(n_bins): # bin数目循环,对应y轴

            col_mask = digitized[reg2] == j

            # PC1 digitized列表中,分档后的值为j的那些行

 

            data = matrix[row_mask, :][:, col_mask]

            # 取出这些xy同一档的元素在OE矩阵中的值

 

            data = data[np.isfinite(data)]

            # 去掉这些结果中OE矩阵对应的值为空的那些

 

            S[i, j] += np.sum(data)

            # accumulate的S矩阵为这些元素的值的和

            C[i, j] += float(len(data))

            # accumulate的C矩阵为这些元素的总个数(count)

 

这一步非常巧妙!因为i和j都是从小到大来的,所以矩阵的[0, 0],即左上角是最小值对应BB (这也是做np.digitize时binedges大小顺序与PC1一致导致的),同时矩阵也是按照位置进行了排序,所以矩阵右下角是最大值AA,同时因为OE matrix是toeplitz矩阵,即沿对角线对称,所以最后拿到的矩阵也是沿对角线对称的,即AB和BA是对称的


有了S和C两个矩阵就可以将两者相除,获得平均值,写入saddledata:

saddledata = S / C


accumulate过程的示意图如下:

10. 计算saddle strength

如果指定了--strength选项,会调用api.saddle.saddle_strength()函数,它以S和C作为输入,在输出saddledata的同时,还会输出saddle_strength,这是一列数值,它的计算方法是沿着每个bin滑动,以这个bin左上角的正方形加上右下角的正方形里的sum值之和,除以这两个正方形区域的count值之和,得到所谓intra值;右上角和左下角的矩形框的sum除以这两个区域总count,得到inter值,saddle_strength = intra / inter。

所以,如果想标出saddle plot中的strength,其实只需要找到前后20%的两个bins对应的这个值即可,即如果n_bins=50,则找到第10个和第40个bin对应的saddle strength值标记出来即可

 

saddle strength计算方法如下示意图:

 

另外,也有一些文章中将AA放到左上角,BB放在右下角,这可能是经过调整的。我们采用cooltools命令行计算的saddle plot,BB和AA的位置如HiC3.0引文(Betul Akgol Oksuz, 2021)中的描述一致:

the upper left corner of the interaction matrix represents the strongest B-B interactions, the lower right represents the strongest A-A interactions, and the upper right and lower left represent B-A and A-B, respectively.

 

参考材料:

[1] Betul Akgol Oksuz, Liyan Yang, Sameer Abraham, et al. Systematic evaluation of chromosome conformation capture assays. 2021. Nature methods

[2] https://github.com/open2c/cooltools

 




https://blog.sciencenet.cn/blog-2970729-1367103.html

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IP: 121.79.146.*   | 璧� 璧� +1 [33]閽卞ぇ楣�   2011-11-20 02:26
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IP: 121.79.146.*   | 璧� 璧� +1 [32]閽卞ぇ楣�   2011-11-20 02:13
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IP: 202.113.12.*   | 璧� 璧� +1 [31]鏉ㄦ鐡�   2011-11-19 12:07
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IP: 67.36.32.*   | 璧� 璧� +1 [30]鏉庡瀹�   2011-11-19 10:44
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IP: 121.32.100.*   | 璧� 璧� +1 [29]wliming   2011-11-19 09:56
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IP: 218.199.39.*   | 璧� 璧� +1 [28]璁告禋杩�   2011-11-19 09:38
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IP: 218.199.39.*   | 璧� 璧� +1 [27]璁告禋杩�   2011-11-19 09:01
[9]zlyang  2011-11-18 18:40
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[3]nwpacific  2011-11-18 17:25
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IP: 49.83.76.*   | 璧� 璧� +1 [26]zongruhua1   2011-11-18 22:50
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IP: 114.91.1.*   | 璧� 璧� +1 [25]鍛ㄥ崕   2011-11-18 21:53
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2011-11-18 22:011 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 121.33.113.*   | 璧� 璧� +1 [24]wliming   2011-11-18 21:44
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2011-11-18 23:481 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 123.116.120.*   | 璧� 璧� +1 [23]鍚翠腑绁�   2011-11-18 21:40
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IP: 121.234.58.*   | 璧� 璧� +1 [22]zongruhua1   2011-11-18 21:24
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2011-11-18 21:271 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 124.207.38.*   | 璧� 璧� +1 [21]wiw   2011-11-18 21:11
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IP: 27.224.226.*   | 璧� 璧� +1 [20]瑁撮懌   2011-11-18 21:11
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IP: 172.17.51.*   | 璧� 璧� +1 [19]涓佷笘璋�   2011-11-18 21:00
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IP: 222.212.186.*   | 璧� 璧� +1 [18]缃楁暀鏄�   2011-11-18 21:00
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2011-11-18 23:521 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 121.27.89.*   | 璧� 璧� +1 [17]WatsonGRlive   2011-11-18 20:16
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IP: 61.171.139.*   | 璧� 璧� +1 [16]niming007   2011-11-18 20:06
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IP: 121.33.113.*   | 璧� 璧� +1 [15]wliming   2011-11-18 19:49
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2011-11-18 21:171 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 175.165.144.*   | 璧� 璧� +1 [14]寮犱竴涓€   2011-11-18 19:24
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IP: 118.113.8.*   | 璧� 璧� +1 [13]鍞愬父鏉�   2011-11-18 19:16
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IP: 122.159.234.*   | 璧� 璧� +1 [12]cacine   2011-11-18 19:14
  
IP: 202.122.32.*   | 璧� 璧� +1 [11]閭㈠織蹇�   2011-11-18 18:52
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2011-11-18 21:261 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 134.94.161.*   | 璧� 璧� +1 [10]鍛ㄨ搐涓�   2011-11-18 18:45
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IP: 202.113.12.*   | 璧� 璧� +1 [9]鏉ㄦ鐡�   2011-11-18 18:40
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[3]nwpacific  2011-11-18 17:25
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IP: 222.247.53.*   | 璧� 璧� +1 [8]鍒樺叏鎱�   2011-11-18 18:14
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2011-11-18 21:421 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 110.156.139.*   | 璧� 璧� +1 [7]sfw111   2011-11-18 18:10
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IP: 218.244.254.*   | 璧� 璧� +1 [6]鐜嬮偊杩�   2011-11-18 18:03
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2011-11-18 21:441 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
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2011-11-18 21:452 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |
IP: 58.211.14.*   | 璧� 璧� +1 [5]璧垫枌   2011-11-18 18:02
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IP: 137.205.164.*   | 璧� 璧� +1 [4]flighteer   2011-11-18 17:31
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IP: 218.199.39.*   | 璧� 璧� +1 [3]璁告禋杩�   2011-11-18 17:25
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IP: 137.205.164.*   | 璧� 璧� +1 [2]flighteer   2011-11-18 17:18
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IP: 121.33.113.*   | 璧� 璧� +1 [1]wliming   2011-11-18 16:56
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2011-11-18 21:161 妤硷紙鍥炲妤间富锛� 璧� 璧� +1 |

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