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流式荧光补偿对照的选择， cells or beads?
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流式分析中，选择好的对照几乎是实验中最重要的步骤。没有正确的对照，不管你的实验结果怎样意义重大，那些实验数据就是数字垃圾，没有任何意义。
对照有很多种，你的实验对照，如，未染色细胞，未刺激细胞，异型对照等等。
还有就是实验方法对照，如，荧光补偿对照，FMO (Fluorescence minus one)
那么接下来重点讲一讲 荧光补偿对照。
什么是好的流式分析的荧光补偿对照呢？
好的对照应该有非常清晰的阳性峰和阴性峰。
但是这种好的对照，不是在所有的细胞和抗体都可以实现的。有时候，你所要测的细胞标记是模糊渐进表达的而不是有清晰的峰值， 或者表达量很少。这时候你如果用这个细胞和抗体来做对照的话，就没有办法确定清晰的阴性群和阳性群。所以很多人用同色的抗体来替代真正的实验抗体，这是可行的。但是也有例外，譬如你用Tandem Dye的时候（不知道Tandem Dye正确的中文翻译是什么？， 象 APC-Cy7, PE-Cy7之类的就属于Tandem Dye）， 因为Tandem Dye 不同批之间的荧光溢漏是不一样的所以不能替代。
还有另外一种情况是你的实验细胞样品非常珍贵，你没有多余的细胞做补偿对照。这时候你可以选择别的细胞而不是你的实验细胞来做补偿对照。或者你可以使用 comp beads， 是一种抗体捕获珠子。你可以讲你的抗体和珠子混合在一起。将它作为你的单染对照。
用珠子的好处是你可以得到非常清晰明亮的峰，是非常好的对照，而且节省你的实验细胞。
BD 出一种产品叫BD comp beads, 其它厂家可能也有，我不是很清楚。 现在可以选择的珠子有，mouse, rat or rat/hamster. 不过你的抗体必须是抗 Kappa light chain of Immunoglobulins. 如果你的多色实验中有其它的抗体，如抗lamda chain, 不能用这个珠子的话，你也可以珠子和细胞一起用。 这时候要注意的一点就是，你的同色荧光的阳性和阴性群必须是基于同一个细胞群的。既阳性和阴性群的自发荧光必须是来自同一个细胞群，不能阳性门基于淋巴细胞而阴性门基于单核细胞. 也不能一个是细胞，一个是珠子，同色荧光的阴阳群必须是同性质的细胞群，拥有一样的自发荧光。 在一点你在采集数据时做软件自动补偿的时候尤其要注意。
https://blog.sciencenet.cn/blog-349948-284046.html
上一篇：硬件补偿和软件补偿的选择
下一篇：FlowJo 的讲座海报和预防甲流的洗手液广告
对照有很多种，你的实验对照，如，未染色细胞，未刺激细胞，异型对照等等。
还有就是实验方法对照，如，荧光补偿对照，FMO (Fluorescence minus one)
那么接下来重点讲一讲 荧光补偿对照。
什么是好的流式分析的荧光补偿对照呢？
好的对照应该有非常清晰的阳性峰和阴性峰。
但是这种好的对照，不是在所有的细胞和抗体都可以实现的。有时候，你所要测的细胞标记是模糊渐进表达的而不是有清晰的峰值， 或者表达量很少。这时候你如果用这个细胞和抗体来做对照的话，就没有办法确定清晰的阴性群和阳性群。所以很多人用同色的抗体来替代真正的实验抗体，这是可行的。但是也有例外，譬如你用Tandem Dye的时候（不知道Tandem Dye正确的中文翻译是什么？， 象 APC-Cy7, PE-Cy7之类的就属于Tandem Dye）， 因为Tandem Dye 不同批之间的荧光溢漏是不一样的所以不能替代。
还有另外一种情况是你的实验细胞样品非常珍贵，你没有多余的细胞做补偿对照。这时候你可以选择别的细胞而不是你的实验细胞来做补偿对照。或者你可以使用 comp beads， 是一种抗体捕获珠子。你可以讲你的抗体和珠子混合在一起。将它作为你的单染对照。
用珠子的好处是你可以得到非常清晰明亮的峰，是非常好的对照，而且节省你的实验细胞。
BD 出一种产品叫BD comp beads, 其它厂家可能也有，我不是很清楚。 现在可以选择的珠子有，mouse, rat or rat/hamster. 不过你的抗体必须是抗 Kappa light chain of Immunoglobulins. 如果你的多色实验中有其它的抗体，如抗lamda chain, 不能用这个珠子的话，你也可以珠子和细胞一起用。 这时候要注意的一点就是，你的同色荧光的阳性和阴性群必须是基于同一个细胞群的。既阳性和阴性群的自发荧光必须是来自同一个细胞群，不能阳性门基于淋巴细胞而阴性门基于单核细胞. 也不能一个是细胞，一个是珠子，同色荧光的阴阳群必须是同性质的细胞群，拥有一样的自发荧光。 在一点你在采集数据时做软件自动补偿的时候尤其要注意。
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