做支原体qPCR，有时候Ct不上不下，既不属于明确阳性，也不属于明确阴性，即业内所说的“灰区”。很多实验室不知道怎么处理，直接判阳性或者阴性，带来结果风险。

翼和试剂盒说明书对灰区有明确操作逻辑：

1.第一步确认内参通道是否正常扩增。如果内参Ct异常，说明样本存在PCR抑制，本次结果无效，重新做样本前处理再复测。

2.如果内参正常，Ct落在灰区区间，不能直接判定阳性，需要重复检测。

3.重复检测：如果复现典型S型扩增曲线，判弱阳性；如果重复无扩增，判阴性。

⚠️ 灰区出现的诱因：样本支原体极低浓度、微量DNA气溶胶污染、样本基质轻微抑制。

部分市面上试剂盒没有设置灰区机制，一刀切Ct阈值，很容易造成假阳性或者漏检。

遇到灰区不要简单粗暴下结论。翼和技术支持可以接收你的原始扩增截图，协助分析灰区成因，给出现场复测建议。

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